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拟南芥DREB1A基因转化紫花苜蓿的研究

霍朝霞

   植物的生长经常受到干旱、高盐和低温胁迫的严重影响。因此,提高植物抗逆性的研究有着极为重要的现实意义。紫花苜蓿(Medicago sativa L.)为世界上重要的豆科牧草,也是优良的水土保持植物。利用基因工程技术来提高苜蓿抗寒、抗旱、耐盐碱能力具有重要意义。本研究采用了农杆菌介导和花粉管通道两种转基因方法,将拟南芥DREB1A基因导入紫花苜蓿,为提高苜蓿抗逆性打下基础。主要结果如下: 1.较系统地研究并优化了紫花苜蓿组织培养再生体系。本研究通过对不同紫花苜蓿品种(阿尔冈金、West blend和WL323)、不同外植体(下胚轴和子叶)、不同基本培养基(MS和SH)以及不同激素浓度组合等影响植株再生因子的筛选和优化,确定了最理想试验材料为阿尔冈金、最适外植体为下胚轴、最佳基本培养基为MS。在不同激素浓度配比中,2 mg/L 2,4-D+0.1 mg/L 6-BA愈伤组织诱导率最高,2 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA芽分化率最高,在1/2 MS+1.0 mg/L IBA的生根培养基上获得再生植株。 2.在已建立紫花苜蓿组培再生体系的基础上,较系统地研究并优化了根癌农杆菌介导的紫花苜蓿遗传转化体系。对影响基因转化的一些因子进行了优化,确定了外植体最佳预培养时间为7d、最佳共培养时间为3d、诱导愈伤组织时的庆大霉素选择压为20mg/L,生根过程选择压为10mg/L。获得的转化再生植株经PCR检测,结果证明目的基因已整合到紫花苜蓿基因组中。 3.较系统地研究建立了紫花苜蓿花粉管通道法转基因技术。在8个不同导入时间,采用2种不同导入方法将4种表达载体pPZP211(35S-DREB1A-NOS)、pPZP221(prd29A-DREB1A-NOS)、pPZP211(prd29A-GUS-NOS)、pPZP221(35S-GUS-NOS)导入紫花苜蓿,PCR检测结果证明外源基因已整合到受体植物基因组中,授粉后20~48h导入所得到的T_0代植株均具有较高的转化率。……   
[关键词]:紫花苜蓿;DREB1A基因;农杆菌介导法;花粉管通道法;遗传转化
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:内蒙古大学2008年