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大观霉素分析检测方法的比较与壮观链霉菌原生质体的制备

金燕华

   大观霉素是一种氨基糖苷类广谱抗生素,对革兰氏阳性菌及革兰氏阴性菌均有抗菌作用,应用前景广阔。因此,对大观霉素进行菌种选育以提高其产量具有重要的社会及经济价值。 本文以试验室筛选的一株高产大观霉素的壮观链霉菌为研究菌株,研究了菌体培养时间、酶浓度、酶解时间、酶解温度、预处理方式等对壮观链霉菌原生质形成和再生的影响,确立壮观链霉菌原生质体形成与再生的最佳条件为:在S培养基中加入0.5%的甘氨酸,以30℃,220 r/min恒温振荡培养36 h(二级培养)的菌丝体为材料,用0.3 mol/L的蔗糖作为酶处理前的菌体洗涤液,溶菌酶浓度为2 mg/mL,37℃酶解120 min;分析比较了HPLC、GC、管碟法、微生物比浊法的优缺点,确定并建立了一种快速、高效、准确的检测方法.微生物比浊法,用于大观霉素发酵液的检测;以NCBI核酸数据库中的spcS2基因序列为模板,运用primerpremier 5.0软件设计引物,PCR扩增了壮观链霉菌中的谷氨酰胺.氨基环醇氨基转移酶基因(spcS2),全长为1460 bp,对其测序并使用Blast与NCBI核酸数据库中的spcS2基因进行比对,两者的相似性达到95%,将其与大肠杆菌.链霉菌穿梭质粒pHZ1272连接,构建重组质粒pHZ1272-spcS2,转化大肠杆菌E.coliDH5α,未得到阳性克隆。……   
[关键词]:壮观链霉菌;原生质体;检测;克隆;PCR
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:浙江工业大学2008年