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鹅细小病毒VP3-ELISA和NS2-ELISA检测方法的建立及抗体消长规律的测定

张雅为

   鹅细小病毒病(Goose parvovirus infection)又称小鹅瘟(Gosling plague,GP)或Derzsy’s病,主要侵害4日龄至20日龄雏鹅和雏番鸭,可以引起急性肠炎及肝、肾、心等实质脏器败血性病变,尤其以小肠部位的纤维性、栓塞性病变为主要特征。由于该病病程短、传播快、死亡率高,造成了严重的经济损失,是目前危害养鹅业健康发展的重要传染病之一。由于该病每年均有不同程度的流行,长期困扰着养鹅业的健康发展,所以需要一种准确、简便的诊断方法来对该病作出准确诊断。 鹅细小病毒基因组含有两个主要开放性阅读框(ORF),分别编码非结构蛋白和结构蛋白。VP3蛋白是鹅细小病毒的主要结构蛋白,暴露于病毒粒子表面,是病毒核衣壳的主要成分,约占总蛋白的80%,具有高度保守性。因其能刺激机体产生具有中和作用的抗体,是研制基因工程重组疫苗的首选目的基因。NS2蛋白作为非结构蛋白,主要参与病毒DNA的复制及调节基因的表达。目前对GPV非结构蛋白的研究较少,我们在实验中发现NS2蛋白具有抗原性,可以诱导机体产生抗体。所以选用结构蛋白VP3和非结构蛋白NS2作为检测抗原。 本试验通过原核表达载体pET-30a,成功构建了pET-30a-NS2重组质粒,通过大肠杆菌表达系统表达GPV-NS2蛋白;对表达GPV-VP3蛋白的阳性菌鉴定正确,通过Ni-NTA系统对两种蛋白分别进行纯化,以纯化的NS2蛋白和VP3蛋白为检测抗原建立两种间接ELISA检测方法,并对其进行优化,确定最佳反应条件。我们应用建立的VP3-ELISA和NS2-ELISA两种检测方法分别对实验免疫的鹅血清抗体进行检测。结果表明VP3蛋白的抗体在免疫后第五周达到最高峰,之后略有下降,可持续到第十四周。NS2蛋白的抗体在免疫后第四周达到最高峰,可持续到第十四周。比较这两种蛋白的抗体消长规律可见,非结构蛋白NS2的抗体最高峰较结构蛋白VP3的早出现一周。通过与中和试验比较,建立的VP3-ELISA检测结果可以反映中和效价变化规律,有望代替中和试验。 本研究建立了VP3-ELISA和NS2-ELISA检测方法,并对鹅细小病毒免疫后的抗体尤其是非结构蛋白进行监测,为鹅细小病毒病的快速诊断、疫情监测、流行病学调查和免疫抗体效价测定提供技术支持。本实验特别选择了GPV非结构蛋白NS2作为检测抗原,为将来使用重组结构蛋白亚单位疫苗免疫动物时鉴别自然感染与疫苗免疫奠定了基础。……   
[关键词]:鹅细小病毒;结构蛋白;非结构蛋白;间接ELISA;抗体消长
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:东北农业大学2008年