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光刺激对母鸡间脑c-fos基因表达的影响

狄慧

   目的:通过对FOS蛋白的检测,来确定由光照刺激引起的c-fos基因在母鸡间脑内的表达,由此来探究光照对鸡生殖性能——即母鸡产蛋量的影响,为进一步了解光照对鸡产蛋的影响机理打下基础。 方法:首先,对母鸡进行光照刺激,将母鸡右眼遮光7天后接受201x的光照刺激1.5h,暗适应1.5h。经遮光和光照刺激后,用两种方法检测FOS蛋白:1)免疫组化方法,灌流固定,取脑制作石蜡切片。通过免疫组化方法检测c-fos基因在间脑的表达,确定FOS蛋白出现最多的神经核团:2)蛋白印迹法,对母鸡进行光照刺激后,直接断头,将鸡头在冰上迅速冷却,然后在低温环境下剥离出鸡脑。将剥离出来的鸡大脑用锡纸包好,迅速放于-80℃冰箱中冷冻。将冷冻后的鸡脑捣碎,10000转/秒离心,提取上清液,测出提取液中的蛋白含量,然后用蛋白印迹法来验证提取液中是否含有FOS蛋白,以此来再次验证FOS蛋白在鸡脑中的存在。 结果:1)免疫组化结果显示,经DAB显色后Fos样免疫反应阳性物质呈棕黄色颗粒,细胞核与胞浆都有Fos蛋白的表达,但主要位于细胞核内,间脑内有大量Fos样免疫反应阳性神经元,主要见于左侧,分布于圆核(ROT)、室旁核(PVN)、前背外侧核(DLA)、外侧膝状核腹侧部(GLv)和缰核(HB)等核团内,其中ROT、和PVN内免疫反应阳性神经元最多。2)蛋白印迹法(western blot)检测的结果显示,49kD到90kD间有明显特异条带,即FOS蛋白条带,证明在母鸡脑蛋白提取液中有FOS蛋白存在。 结论:在这些核团中,Fos样免疫反应阳性神经元多,而且多呈强阳性或阳性,这表明这些核团的神经元在光信息光信息传递中起重要作用。而这些神经核团与鸡生理和生产机能调节又密切相关,以此来推论出,光照通过这些核团接受光刺激从而影响产蛋量的。……   
[关键词]:母鸡;间脑;c-fos基因;免疫组织化学;Western blot
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:河北农业大学2008年