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猪附红细胞体小鼠感染模型的建立及血液学指标的检测

余飞

   本研究对猪附红细胞体(EH)的不同实验室检测方法、小鼠模型建立以及附红细胞体感染小鼠后的血液学免疫学变化进行了较深入的探讨。 一、猪附红细胞体实验室检测方法的建立 本研究采用了光学显微镜镜检(包括鲜血滴片镜检和瑞氏-姬姆萨染色镜检)、透射电镜观察以及PCR检测方法检测猪EH。鲜血滴片镜检和瑞氏-姬姆萨染色涂片均能清晰地观察到EH的形态结构,但此两种方法易产生假阳性,需要透射电镜检测或者是PCR检测作为辅助诊断。通过透射电镜可以观察到EH的超微结构,发现EH附着于红细胞表面从而引起红细胞内陷,其结果可以作为诊断依据,但此法操作复杂,成本较高,不宜作为临床普及使用。 本研究根据已有的猪EH特异性片段设计引物,成功地扩增得到810 bp的PCR产物。本实验所建立的猪EH的PCR检测方法具有高度的特异性和敏感性,可以用于猪附红细胞体病的流行病学调查。同时,本研究初步建立了猪EH的SYBR Green荧光定量PCR检测方法。根据已有的猪EH特异性片段设计引物,通过条件的优化,建立的方法简便快速,特异性高。 二、猪附红细胞体小鼠感染模型的建立 本研究分别采用感染猪附红细胞体病的猪全血和分离纯化的猪EH作为感染源攻毒SPF昆明小鼠,感染后通过血液压滴片镜检,PCR检测及透射电镜检测鉴定模型建立成功。结果显示采用分离纯化的猪EH作为感染源的攻毒小鼠在感染后3 d左右感染率(感染附红细胞体的红细胞所占红细胞总数的比率)达到了高峰,而后又下降。而采用感染猪EH的猪全血作为感染源的攻毒小鼠一直维持一种低的感染状态。表明采用分离纯化的猪EH作为感染源可以取得更为良好的效果,此模型可用于附红细胞体病致病机制和药物筛选等方面的研究。 三、人工感染猪附红细胞体对小鼠血液学及免疫学指标的影响 在构建猪EH小鼠感染模型的基础上,研究了感染后血液常规指标,RBC-IC花环率和脾淋巴细胞转化功能的变化,旨在为附红细胞体病跨种间感染机制研究以及免疫功能变化研究提供借鉴。研究结果显示小鼠感染EH后红细胞总数减少,血红蛋白含量降低,红细胞比容降低,RBC-IC花环率上升,其他指标没有显著变化。提示EH感染可能并不能引起机体强烈的细胞免疫应答,但是可能对非特异的红细胞免疫系统有影响。具体机制有待进一步研究。 通过本研究,建立了猪EH光镜、透射电镜及PCR检测方法,并建立了EH的SPF小鼠感染模型,研究了EH感染对血液常规指标,红细胞免疫粘附功能以及淋巴细胞转化功能的影响,初步探索了附红细胞体病免疫致病机理,为防止附红细胞体病的爆发流行提供了前期的理论与技术储备,对附红细胞体病的综合防治措施制订具有重要意义。……   
[关键词]:附红细胞体;检测方法;小鼠模型;血液学;免疫学
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:上海交通大学2008年