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一株具有抑菌活性的越橘内生细菌的研究

徐大可

   本论文以越橘野生种及栽培品种成年植株为材料,进行了内生细菌的分离及筛选,获得1株对真菌具较强抑制活性的菌株,并对其进行了鉴定,同时还对该菌株的培养条件、在越橘体内的定殖及抑菌活性物质进行了研究。 研究结果表明,材料来源、取材部位、表面消毒方法及分离方法都直接影响内生细菌的分离效果,野生种、根部、组织匀浆法分离到的内生菌数量较多。用12种病原真菌对本研究分离到的21株内生细菌进行了筛选,结果表明,其中一个菌株对菜豆锈病(Uromyces appendiculatus)抑菌率达70.5%,对两种越橘叶斑病病原菌Pestalotiopsis sp.和Cylindrocladium colhounii的抑制率分别达68.6%和57.7%。形态学、生理生化及分子生物学鉴定结果表明,该菌株为粘质沙雷氏菌(Serratia marcescens),这是国内外首次报道从越橘中分离到Serratia marcescens,将其命名为Serratia marcescens DUT。 培养条件的研究结果表明,DUT菌株培养8h可达对数生长期,24 h~32 h为稳定生长期,32 h以后为衰老期。该菌在pH3.5~9.5、温度20℃~37℃都能生长,最适生长pH为7,最适生长温度为28℃。实验对用于培养DUT菌株的葡萄糖铵盐培养基进行了优化,优化后培养基配方为:葡萄糖10 g/L,硫酸铵10 g/L,柠檬酸钠1 g/L,磷酸氢二钾0.3 g/L,硫酸镁0.25 g/L。用利福平标记后的菌株回接越橘后发现,在植株的根、茎部都能回收到该菌,初步说明该菌株能在越橘体内定殖。 DUT菌株在附加几丁质的培养基中可以产生透明圈,证实该菌能够产生几丁质酶,发酵32 h后测得粗酶液的酶活力可达20.11 U/mL。论文还通过PCR方法,从DUT菌株中扩增出chiA和chiB基因,Genbank登录号为EU019911和EU019912。……   
[关键词]:越橘;内生细菌;粘质沙雷氏菌(Serratia marcescens);几丁质酶
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:大连理工大学2007年