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rolC基因转化葡萄砧木‘5BB’的研究

李金凤

   本研究以葡萄砧木‘5BB’(V.berlandierixV.riparia)为材料,建立了叶柄不定芽离体再生的体系,采用农杆菌介导法和超声波辅助农杆菌介导法两种方法将rolC基因导入葡萄砧木‘5BB’中,系统地探讨了提高‘5BB’再生率和影响遗传转化效率的因子,优化了农杆菌介导法的主要技术参数,建立了超声波辅助农杆菌介导法的遗传转化体系。研究结果如下: 1.以葡萄砧木‘5BB’试管苗离体叶柄为外植体诱导不定芽再生。研究了不同基本培养基、外植体类型、植物生长调节剂的种类及其浓度组合等因素对‘5BB’再生的影响。结果表明,MS基本培养基为较适合的叶柄再生基本培养基,着生于顶端第2、3节位的叶柄为适宜的外植体,适于叶柄再生的植物生长调节剂种类及浓度组合为BA2.5mg/L,IBA0.05mg/L,叶柄再生频率最高可达到43.33%。 2.以葡萄砧木‘5BB’的叶柄为农杆菌介导转化受体,通过对GUS基因瞬时表达率的分析,优化了农杆菌介导的遗传转化技术体系。实验表明,侵染4min、共培养2d、预培养3d,卡那霉素选择压2.5mg/L,头胞霉素浓度250mg/L时可获得40%的GUS瞬时表达率。 3、建立了超声波辅助农杆菌介导法转化葡萄砧木‘5BB’的遗传转化体系:茎段为适合的外植体类型,超声波处理时间为8s,功率为100W,AS为75mg/L时GUS瞬时表达率最高可达40%。 4、将rolC基因转入葡萄砧木‘5BB’中,经GUS组织化学染色和PCR扩增检测,初步断定rolC基因已整合到‘5BB’2个株系的基因组中。……   
[关键词]:葡萄砧木'5BB';再生;农杆菌介导;超声波辅助农杆菌介导;rolC基因
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:南京农业大学2007年