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联苯菊酯和氯氟氰菊酯酶联免疫吸附测定法研究

李波

   为探讨有关拟除虫菊酯类杀虫剂的免疫化学特性,选择了两个代表性的品种联苯菊酯和氯氟氰菊酯为研究对象。建立了联苯菊酯和联苯醇的间接竞争性酶联免疫吸附测定方法;并进行了半抗原设计与其抗体特异性关系的初探。 利用联苯菊酯的代谢物联苯醇合成了联苯菊酯的半抗原LBc(2-甲基-3-苯基苄基氧基羰基丙酸)、LBs(2-甲基-3-苯基苄基-3-羧基一2,2-二甲基环丙烷羧酸)和LBy(2-甲基-3-苯基苯甲酸)。通过碳二亚胺法将LBc和LBs交联于牛血清蛋白(BSA)作为免疫抗原,通过活泼酯法将分别LBc、LBs和LBy交联于卵清蛋白(OVA)作为包被抗原,LBc-BSA和LBs为免疫原制备了联苯菊酯的兔抗血清,非竞争间接酶联免疫吸附分析方法测得其效价达5.12×10~4和3.2×10~5。通过同源异源分析,发现异源分析的灵敏度较高,并对pH值、离子强度、甲醇含量等影响因素进行了研究,确定pH7.5、0.3M钠离子强度的磷酸缓冲液和30%的甲醇为联苯菊酯间接竞争酶联免疫吸附分析方法的最佳工作条件,该方法的IC_(50)为2.16mg/L,最低检测限(LDL)为0.016mg/L。对大部分拟除虫菊酯,如氯氟氰菊酯、溴氰菊酯、氯氰菊酯、氰戊菊酯、甲氰菊酯和拟除虫菊酯的代谢物3-苯氧基苯甲酸没有明显的交叉反应。用抗体LBc-Ab,Lby-OVA的组合建立了联苯醇的间接竞争酶联免疫吸附分析方法,该方法的IC_(50)为1.38μg/L,最低检测限(LDL)为0.056μg/L,对其他拟除虫菊酯及其代谢物没有交叉反应。 通过对氯氟氰菊酯分子结构中的酸部分接4-氨基丁酸(HCA1)和醇部分接丁二酸酐(HCB2),合成两种不同的半抗原,并通过碳二亚胺法将HCA1和HCB2分别与牛血清蛋白(BSA)偶联制备了人工抗原HCA1-BSA和HCB2-BSA,通过活泼酯法将HCA1、HCAS和HCB2分别与卵清蛋白(OVA)偶联制备包被抗原,两种人工抗原通过免疫新西兰大白兔来制备相应的多克隆抗体。结果表明,用HCA1-BSA获得的多克隆抗体对氯氟氰菊酯和氯氟氰菊酸有免疫反应性(IC_(50)分别为33.12和0.95 mg/L),用HCB2-BSA获得的多克隆抗体对氯氟氰菊酯几乎没有免疫反应性。为了制备对单一拟除虫菊酯高特异性的抗体,以菊酸和氰醇为起始原料,通过水解、酯化反应合成了半抗原N-2-(羧基丙基)氨甲酰-(3-苯氧基苄基)甲基-3-(2-氯-3,3,3-三氟丙烯基)-2,2-二甲基环丙烷羧酸酯,为进一步制备抗三氟氰菊酯的特异性抗体奠定基础。……   
[关键词]:联苯菊酯;氯氟氰菊酯;半抗原;多克隆抗体;ELISA
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:南京农业大学2007年