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怀山药的组织培养及其相关研究

邓丽娟

   本文第一章利用正交设计L_9(3~+)考察3种外源激素(IBA、NAA、6—BA)对怀山药(Dioscorea opposite Thunb)不带腋芽的节段的分化培养和植株再生的影响。IBA、NAA、6—BA的3个水平分别是0、0.4、0.8(mg/L,以下单位相同),0.25、0.5、1.0,0.5、1.5、2.0。九个激素组合分别是:(1) 2.0 mg/L 6—BA+1.0 mg/LNAA+0.8 mg/LIBA,(2) 2.0 mg/L 6—BA+0.5 mg/LNAA+0.4 mg/LIBA,(3) 2.0 mg/L 6—BA+1.0 mg/LNAA+0.8 mg/LIBA,(4) 1.5 mg/L 6—BA+1.0 mg/LNAA+0.4 mg/LIBA,(5) 1.5 mg/L6—BA+0.5 mg/LNAA+0 mg/LIBA,(6) 1.5 mg/L 6—BA+0.25mg/LNAA+0.8 mg/LIBA,(7) 0.5 mg/L 6—BA+1.0 mg/LNAA+0mg/LIBA,(8) 0.5 mg/L 6—BA+0.5 mg/LNAA+0.8 mg/LIBA,(9) 0.5 mg/L 6—BA+0.25 mg/LNAA+0.4 mg/LIBA。通过本试验得到适合怀山药不带腋芽的节段分化培养的最佳培养基:改良MS+100g/L香蕉+0.5mg/L6-BA+1.0mg/LNAA+0.5%琼脂+0.5%活性炭+3%蔗糖。壮苗培养基为:改良MS+100g/L香蕉+0.5mg/LNAA+0.5%琼脂+0.5%活性炭+3%蔗糖。在转入生根壮苗培养基20天~30天,无菌苗形成圆形微型块茎(Microtuberization),60天时形成率为100%,直径约为5mm~12mm,形成数量较多(一株可形成1~3个,且形成一个的较少)。 在本文中,首次对无菌苗的叶柄、茎段和根块在6-BA、NAA、IBA的不同浓度组合下直接分化成苗进行了探讨,选出的最适合这三种外植体直接分化成苗途径的激素组合分别是:最适无菌根块分化培养基是,改良的MS+100g/L香蕉+0.5 mg/L 6-BA+0.25 mg/L NAA+0.4mg/L IBA+0.5%琼脂+0.5%活性炭+3%蔗糖;最适无菌茎段分化的培养基是,改良MS+100g/L香蕉+0.5 mg/L 6-BA+0.5mg/L NAA+0.8mg/L IBA+0.5%琼脂+0.5%活性炭+3%蔗糖;最适无菌叶柄分化的培养基是,改良MS+100g/L香蕉+1.5/L 6-BA+0.25 mg/L NAA+0.5%琼脂+0.5%活性炭+3%蔗糖。通过试验首次实现叶柄和根块直接分化成苗,并且使茎段和根块的分化率达到了100%,并证明,无菌根块是研究怀山药直接分化成苗的一个良好的培养系统。 在本文的第三章采用火焰原子吸收法测定了山药组培微块茎和培养前后培养基中的K、Cu、Fe、Mn、Zn五种金属元素的含量。实验结果表明,除Cu外,其余四种元素的含量均高于相关报道文献数倍甚至数十倍(已有文献报道的山药成品中的钾2563~7147mg/L、锌2.4~7.2 mg/L、铁5.7~24 mg/L、锰0.3~3.8 mg/L、铜0.9~3.2 mg/L,而本试验测得的各金属元素的含量是钾132182.27 mg/L,铁126.43 mg/L,铜1.23 mg/L,锌31.06 mg/L,锰69.51 mg/L),这也说明在组培条件下形成的微型块茎对金属元素的富积能力高于在自然生长条件下。培养基在培养前后,除Mn消耗明显外,其余元素无明显变化。 在样品的消解方法上,本试验提出了新的较为方便的方法:准确称取2.000g干燥样品于洁净的聚四氟乙烯烧杯中,加浓硝酸31ml,在电热炉上加热近干,再补加10~15ml浓高氯酸,继续加热,至溶液开始产生高氯酸白烟并变澄清透明,取下表面皿,加热赶尽高氯酸,用1%的硝酸定容至50ml待测。……   
[关键词]:怀山药;组织培养;金属元素
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:四川大学2007年