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细胞分化在细胞周期进程中的时相性研究

文若剑

   背景和目的: 细胞分化是细胞生物学研究的核心问题之一,研究发现当细胞受细胞外生长信号刺激后,细胞周期机制驱动着细胞的增殖,联系着细胞的凋亡,进而发现其调控着细胞的分化。但细胞周期机制如何调控细胞分化尚不明确。在本部分实验中我们用全反式维甲酸(all trans retinoid acid,ATRA)诱导HL-60细胞分化,研究此分化模型中细胞周期的变化以及细胞分化在细胞周期中的时相性规律。 方法: HL-60细胞经分化诱导剂ATRA (终浓度为1μmol/L)诱导不同时间点后,通过流式细胞仪检测细胞表面分化标志物CD11b的表达以及分选后共聚焦显微技术来证实细胞分化模型构建成功;用单参数流式细胞术检测细胞内DNA含量来分析分化细胞的细胞周期分布;创新应用CD11b/DNA双参数流式细胞数术同时检测分化细胞表面抗原CD11b的表达及分化细胞核DNA含量,观察分化细胞在细胞周期中的时相性表达。 结果: HL-60细胞经ATRA诱导后,细胞表面分化抗原CD11b表达明显升高,诱导72小时阳性率达到16.68%(对照组细胞阳性率为1.65%),分选CD11b表达阳性的细胞用共聚焦显微镜观察,细胞核形态向成熟粒细胞变化。诱导后HL-60细胞阻滞于G0/G1期,且CD11b表达阳性细胞主要位于G0/G1期。 结论: ATRA能诱导HL-60细胞分化,分化细胞主位于细胞周期进程中的G0/G1期。 目的: 用阿非迪霉素诱导HL-60细胞来构建细胞分化模型,研究细胞细胞分化在细胞周期进程中的时相性表达。 方法: HL-60细胞经分化诱导剂阿非迪霉素(终浓度为1μg/ml)诱导不同时间点后,通过流式细胞仪检测细胞表面分化标志物CD11b的表达以及分选后共聚焦显微技术来证实细胞分化模型构建成功;用单参数流式细胞术检测细胞内DNA含量来分析分化细胞的细胞周期分布;应用CD11b/DNA双参数流式细胞数术同时检测分化细胞表面抗原CD11b的表达及分化细胞核DNA含量。 结果: HL-60细胞经阿非迪霉素诱导,12小时后细胞表面分化抗原CD11b表达有所升高,阳性率为9.68%(对照组细胞阳性率为0.33%),分选CD11b表达阳性的细胞用共聚焦显微镜观察,细胞核形态向成熟粒细胞变化。诱导后HL-60细胞阻滞于S期,且CD11b表达阳性细胞主要位于S期。 结论: 阿非迪霉素能诱导HL-60细胞分化,分化细胞主要位于细胞周期进程中的S期。 目的: 六亚甲基二乙酰胺(HMBA)是一种能诱导急性髓系白血病细胞分化的极性化合物,我们在这部分研究中构建HMBA诱导HL-60细胞的分化模型来观察细胞周期分布的变化以及分化细胞在细胞周期中的时相性规律。 方法: HL-60细胞经分化诱导剂HMBA (终浓度为10μmol/L)诱导不同时间点后,通过流式细胞仪检测细胞表面分化标志物CD11b的表达以及分选后共聚焦显微技术来证实细胞分化模型构建成功;用单参数流式细胞术检测细胞内DNA含量来分析分化细胞的细胞周期分布;应用CD11b/DNA双参数流式细胞数术同时检测分化细胞表面抗原CD11b的表达及分化细胞核DNA含量,研究细胞分化在细胞周期进程中的发生规律。 结果: HL-60细胞经HMBA诱导后,细胞表面分化抗原CD11b表达明显升高,诱导24小时阳性率达到28.12%(对照组细胞阳性率为0.60%),共聚焦显微镜发现,分选后的细胞核形态向成熟粒细胞变化。诱导后HL-60细胞阻滞于G2/M期,且CD11b表达阳性细胞主要位于G2/M期。 结论: HMBA能诱导HL-60细胞分化,分化细胞主要位于细胞周期进程中的G2/M期。……