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通用干扰素与胸腺肽α1融合基因构建与表达研究

戚颖欣

   临床上常将干扰素(IFN)和胸腺肽(THYa_1)联合使用.本文通过DNA重组技术将两者构成一个融合蛋白药物。首先,依据IFN和THYa_1的分子结构,设计了一个14个氨基酸的连接肽,将IFN和THYa_1相连,并分别位于该融合蛋白的N端和C端,本实验用PCR将化学合成的胸腺肽a_1基因与干扰素基因通过PCR扩增拼接并克隆到PGEM-T载体中,构建克隆质粒PGEM-IFNTHY。基因序列分析表明,目的基因为647bp,与设计序列完全一致。 IFNTHY基因在原核细胞中表达,在成功完成IFNTHY基因的克隆后,克隆质粒PGEM-IFNTHY经过EcoRⅠ/HindⅢ酶切,连接将胸腺肽干扰素基因插入到表达载体PET28A中。将重组质粒转化至表达宿主BL21(DE3)中,经IPTG诱导,SDS-PAGE和Westerblot检测结果显示,PET28-IFNTHY基因得到正确高效表达。Zn_Sepharose亲和层析纯化以及复性处理,从每升菌液中可获得35mg胸腺肽a_1融合蛋白干扰素。Zn_Sepharose和层析以及纯化获得3.8mg重胸腺肽干扰素。……   
[关键词]:THY;IFN;克隆;序列分析;原核表达;活性测定
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:吉林大学2007年