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极谱法在蛋白质测定中的应用

徐大军

   蛋白质是重要的生命物质,同很多生命现象密切相关。蛋白质的定量测定是生命科学中经常涉及的内容,也是临床检验中诊断疾病和检验治疗效果的重要指标。近年来电化学分析方法在生物分析化学中得到了广泛的应用,己成为生命科学研究中最基础的手段之一。本论文利用单扫描极谱上的络合吸附波,平行催化波测定蛋白质,共分为五章。 第一章简述了蛋白质和血红素的定量分析方法及极谱络合吸附波和平行催化波的理论知识和研究应用。 第二章研究了血清白蛋白的络合吸附波法测定。在pH6.3的HAc-NaAc介质中,血清白蛋白使锌(II) - 2,2 -联吡啶络合物在–1.20V(Vs SCE)络合吸附波还原峰电流降低,峰电流降低值与加入的牛血清白蛋白(BSA)或人血清白蛋白(HSA)的浓度在一定范围内呈线性关系。BSA在0.5~40mg/L范围内,HSA在0.5~50mg/L范围内呈线性关系,检出限均为0.2mg/L。应用该法测定了人血清样品中总蛋白含量,结果令人满意。 第三章利用平行催化波测定了氯化血红素。在pH9.5的NH3-NH4Cl缓冲溶液中,氯化血红素在单扫描极谱上于–0.70 V (vs.SCE)处有一不灵敏的还原波,加入过硫酸钾可以产生一灵敏的动力波,波高增大了约20倍。利用该波检测氯化血红素,线性范围为7.5×10-8 mol/L~4.5×10-6 mol/L,检出限为5.0×10-8 mol/L。机理研究表明,该动力波为具有吸附性的平行催化波。 第四章探讨了蛋白质三元络合物的催化前波及蛋白质的灵敏测定。提出了一种以钴(II)- 2,2 -联吡啶络合吸附体系在滴汞电极(DME)上测定蛋白质的新方法。用线性扫描极谱法、循环伏安法等手段研究了该催化作用产生的机理。实验表明,蛋白质与钴(II)- 2,2 -联吡啶形成三元络合物,催化了络合物中2,2 -联吡啶的还原。在pH3.5柠檬酸钠-盐酸缓冲溶液中,利用该三元络合物中2,2 -联吡啶的催化还原间接测定了蛋白质的含量。对于BSA,HSA,溶菌酶,线性范围为0.005~16mg/L,检出限为0.002 mg/L。 第五章研究了蛋白质与钴(II) -邻菲咯啉络合物的相互作用及分析应用。在pH 3.5的柠檬酸钠-盐酸缓冲溶液中,钴(II)-邻菲咯啉络合物在单扫描极谱上于–1.10 V (vs.SCE)处有一络合吸附波,加入蛋白质后产生一新的吸附波,还原电位为–1.06V (vs.SCE)。该波一阶导数波高与蛋白质浓度在一定范围内呈线性关系,对于牛血清白蛋白(BSA),线性范围为0.02~18 mg/L,检出限为0.01 mg/L;对于人血清白蛋白(HSA),线性范围为0.05~20 mg/L,检出限为0.02 mg/L。采用此法对样品进行分析测定,结果令人满意。……   
[关键词]:血清白蛋白;络合吸附波;锌(II)- 2;2'-联吡啶络合物;氯化血红素;过硫酸钾;平行催化波;钴(II);2;2'-联吡啶;邻菲咯啉;催化前波
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:中南民族大学2007年