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抗弧菌中草药的筛选及其活性化合物的分离纯化

李爱娟

   弧菌病是水产养殖鱼类最重要的细菌病之一,其暴发性强,不易控制,每年给水产养殖业造成重大的经济损失。目前细菌性病害的防治主要依靠抗生素及化学药物,不仅污染水体环境,而且对鱼体造成伤害,降低鱼体免疫力,形成恶性循环。而且大量使用抗生素,使耐药性菌株不断出现,使病害更加难以控制。 用乙醇浸渍法提取了53种常见中药有效成分,采用平板扩散法研究了对主要致病鳗弧菌(Vibrio anguillarum)、副溶血弧菌(V.parahaemolyticus )的抑菌作用,发现金银花、大黄、五倍子、五味子、肉桂、月季花、乌梅、诃子、青果等这九种中药有较强的抑菌活性;进一步研究了这些药物的抑菌谱,除金银花外,五倍子、五味子、肉桂、大黄、月季花、乌梅、诃子、青果对哈维氏弧菌(V.harveyi)、拟态弧菌(V.mimicus)、溶藻胶弧菌(V.alginolyticus)、创伤弧菌(V. vulnificus)、坎贝氏弧菌(V. campbelli)、费氏弧菌(V. fischeri)、豚鼠气单胞菌(Aeromonas caviae)、嗜水气单胞菌(A.hydrophila)、迟缓爱得德华氏菌(Edwardsiella tarda)均具有不同程度的抗菌活性,其中乌梅,诃子、青果对所测12个菌株均表现抑菌活性;肉桂对拟态弧菌(V.mimicus)表现极强抑菌活性,抑菌圈直径达42mm。 采用硅胶柱层析、Sephadex LH-20凝胶柱层析对月季花乙醇粗提液有效抗菌成分进行了分离纯化,得到51mg无色针状结晶。通过质谱(ESI-MS),核磁共振谱(1H-NMR、13C-NMR、13C-dept)对其结构进行鉴定,根据光谱数据并与文献对照,发现该化合物的相关数据与没食子酸(gallic acid )的一致,通过TLC技术,与标准品对照,最后鉴定该化合物为没食子酸(gallic acid)。 采用平板扩散法,研究了该化合物对哈维氏弧菌、副溶血弧菌、溶藻胶弧菌、鳗弧菌、创伤弧菌、坎贝氏弧菌、拟态弧菌、豚鼠气单胞菌、嗜水气单胞菌、猪霍乱沙门氏菌(Salmonella choleraesuis )、肺炎克雷伯菌肺炎亚种(Klebsilla pneumoni aesubsp)、产碱假单胞菌(Pseudomonas alcaligenes)、普通变形杆菌(Proteus vulgaris)、牛莫拉氏菌(Morascella bovis )、迟缓爱德华氏菌( Edwardsiella tarda )、单增李斯特菌( Listeria monocytogenes )、金黄色葡萄球菌( Staphylococcus aureus )的抑菌效果,发现gallic acid特异性抑制哈维氏弧菌、副溶血弧菌、溶藻胶弧菌、鳗弧菌、创伤弧菌,而对所测其它弧菌及非弧菌属不表现活性。 采用试管二倍稀释法测定了gallic acid对鳗弧菌(V. anguillarum) CW1的最小抑菌浓度(MIC),并与常见抗生素卡那霉素(kanamycin)进行了比较研究。结果发现,没食子酸(gallic acid)对鳗弧菌(V. anguillarum)CW1的最小抑菌浓度为25.6μg mL~(-1)(1.5×10~(-1)μmolml~(-1)),而卡那霉素(kanamycin)对鳗弧菌(V. anguillarum) CW1的最小抑菌浓度为51.2μg mL-1(8.6×10~(-2)μmolmL~(-1))。……   
[关键词]:弧菌;中药;没食子酸;抑菌谱
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:中国海洋大学2007年