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鳜B淋巴细胞的发生和T淋巴细胞受体基因的克隆

田敬云

   鳜是我国重要的淡水养殖鱼类,但是近年来各种疾病的发生严重影响了其产量,对鳜免疫系统的研究不仅在系统发育方面具有重要意义,在鱼病防治方面也具有重要的实际应用价值。因此本论文对鳜B淋巴细胞的个体发生、三种免疫球蛋白的表达及T细胞抗原受体基因恒定区进行了研究。 利用原位杂交技术检测到IgM阳性细胞首先在孵化后20天出现在鳜头肾中,随后在26天和39天的脾脏和胸腺中相继检测到,在肠和鳃等粘膜免疫组织中IgM阳性细胞出现的比较晚,大约在孵化后3个月左右开始出现。另外利用原位杂交技术检测了IgD和IgZ在鳜成鱼组织中的分布。IgD仅在头肾和脾脏中检测到,阳性细胞数量较少。肠和鳃中未发现IgD阳性信号。IgZ阳性细胞在头肾、脾脏、鳃中都有分布,在头肾和脾脏中阳性细胞较少,鳃中阳性细胞数量较多,分布规律类似于IgM。 通过实时定量PCR检测了三种Ig在注射灭活柱状黄杆菌后鳜头肾、脾脏、血液、鳃组织中表达量的变化趋势。结果显示IgM在各组织中的表达都有较大幅度的上调,且加强免疫组要比初次注射组上调幅度大。IgD和IgZ表达上调幅度要比IgM小,但在鳃中上调较明显,提示可能在粘膜免疫中发挥重要作用。 对TCRα、β、γ基因恒定区的扩增及氨基酸序列分析发现它们都具有典型的TCR结构,分为Ig区(Ig)、连接肽(CPS)、跨膜区(TM)和胞内区(CYT)四个蛋白结构域。跨膜区是最保守的区域。各链中具有多个与功能相关的保守性位点。例如二硫键形成位点,TCR异二聚体形成位点,Ig和MHC特征性序列,保守性抗原受体跨膜基序(CART)等。表达分析显示TCR三条链在各组织中都能在mRNA水平检测到,但在淋巴组织如头肾、脾脏、胸腺、鳃中有较高水平的表达。在注射灭活柱状黄杆菌的鳜胸腺、鳃、肠等组织中有明显上调表达现象。……   
[关键词]:;B细胞;免疫球蛋白;T细胞受体;原位杂交;实时荧光定量PCR
[文献类型]:博士论文
[文献出处]:中国科学院研究生院(水生生物研究所)2007年