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抗嗜水气单胞菌单克隆抗体和抗温和气单胞菌单克隆抗体的制备及鉴定

陈瑞

   嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila,Ah)和温和气单胞菌(Aeromonas sobria,As)分布于世界各地,广泛存在于淡水、咸淡水和污水中,对养殖及野生鱼、虾、蛙、甲鱼等生物有致病性,并可进一步通过食物链感染人,造成人类的腹泻和败血症等。它们所致鱼类等嗜水气单胞菌病和温和气单胞菌病具有流行广、发病快、死亡率高等特点,常常造成养殖渔业的巨大经济损失,严重危害渔业及其它水产业的发展。目前国内外有关嗜水气单胞菌鱼病和温和气单胞菌鱼病的研究多局限于病原微生物学方面,对该病的诊断主要依靠病理观察及细菌学鉴定,两种方法在准确性及检测速度上均有一定限制;防治方面主要利用抗生素或减活、灭活疫苗,安全性和有效性均不理想。鉴于此,本研究设计制备抗嗜水气单胞菌单克隆抗体和抗温和气单胞菌单克隆抗体,为嗜水气单胞菌病和温和气单胞菌病的检测及治疗提供新的技术方法,并为进一步制备其抗独特型单克隆抗体奠定了基础。具体实验方法及结果如下: (1)通过动物免疫、细胞融合、筛选、克隆化及利用ELISA检测技术,制备并鉴定抗嗜水气单胞菌的单克隆抗体(mAb)和抗温和气单胞菌的单克隆抗体(mAb)。获得5株能稳定分泌抗嗜水气单胞菌mAb的杂交瘤细胞株,分别命名为1A8、1F11、1G10、3F11、4G10。经测定杂交瘤细胞培养上清及其诱生的腹水mAb效价分别为1×10~(-2)~1×10~(-3)、1×10~(-5)~1×10~(-6)。5株杂交瘤细胞系所分泌的单抗亚类是:1F11为IgG1,1A8为IgG2a,1G10、3F11、4G10为IgG2b。其中mAb 3F11经交叉反应试验证明,与弧菌属其它几种细菌均不起反应,特异性强。获得6株能稳定分泌抗温和气单胞菌mAb的杂交瘤细胞株,分别命名为1A8、2A8、2F11、3C6、3D11、4G2。经测定杂交瘤细胞培养上清及其诱生的腹水mAb效价分别为1×10~(-2)~1×10~(-3)、1×10~(-5)~1×10~(-6)。6株杂交瘤细胞系所分泌的单抗亚类是:2A8、2F11为IgG1,1A8、3D11为IgG2a,3C6为IgG2b,4G2为IgG3。其中mAb 3C6经交叉反应试验证明,与弧菌属其它几种细菌均不起反应,特异性强。它们可分别用于嗜水气单胞菌和温和气单胞菌的检测及进一步研究。 (2)以嗜水气单胞菌和温和气单胞菌分别感染乳鼠为模型。对制备的5株抗嗜水气单胞菌单抗的治疗保护效果进行研究。结果表明:单抗1G10能提高受10LD_(50)剂量嗜水气单胞菌感染乳鼠的存活率,其保护率为62.50%,对乳鼠具有明显保护效果。上述结果提示单抗1G10所针对的可能是嗜水气单胞菌的中和性抗原表位,具有免疫中和或减弱细菌毒性的作用,可用作鱼类嗜水气单胞菌感染的中和性抗体治疗制剂,也可作为制备嗜水气单胞菌抗独特型抗体的理想候选单克隆抗体。对制备的6株抗温和气单胞菌单抗的治疗保护效果进行研究。结果表明:单抗3C6能提高受10LD_(50)剂量温和气单胞菌感染乳鼠的存活率,其保护率为62.50%,对乳鼠具有明显保护效果。上述结果提示单抗3C6所针对的可能是温和气单胞菌的中和性抗原表位,具有免疫中和或减弱细菌毒性的作用,可用作鱼类温和气单胞菌感染的中和性抗体治疗制剂,也可作为制备温和气单胞菌抗独特型抗体的理想候选单克隆抗体。 综上所述,本研究利用杂交瘤技术分别制备出多株抗嗜水气单胞菌的单克隆抗体和抗温和气单胞菌的单克隆抗体,利用乳鼠观察了治疗保护效果,分别筛选出1株具有保护作用的细胞株,为嗜水气单胞菌病和温和气单胞菌病的诊断、治疗提供了条件。嗜水气单胞菌单克隆抗体和温和气单胞菌单克隆抗体的研究,国内外迄今未见报道。……   
[关键词]:嗜水气单胞菌;温和气单胞菌;单克隆抗体;杂交瘤;细胞株;BALB/c小鼠;酶联免疫吸附实验
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:第四军医大学2007年