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曲尼司特局部注射抑制兔耳增生性瘢痕的实验研究

于蓉

   研究背景 瘢痕,尤其是病理性瘢痕(增生性瘢痕和瘢痕疙瘩),给患者的身体和精神带来严重损害,因此是整形乃至整个外科领域研究的重点。迄今为止,虽然有多种治疗方法,但是缺乏一种可靠而有效的方法。目前药物治疗中最常用的是糖皮质激素局部应用。糖皮质激素通过抑制成纤维细胞增殖及胶原合成、促进细胞凋亡对病理性瘢痕有明显的疗效,但长期应用容易引起患者内分泌紊乱,这一副作用使之在临床上应用时受到限制。寻找一种良好的病理性瘢痕治疗的局部用药一直是皮肤科和整形科医师关注的焦点 曲尼司特(Tranilast,TNL)化学名为N-(3’,4’—二甲氧基肉桂酰)氨茴酸,临床上常用于治疗变态反应性疾病。通过抑制肥大细胞和嗜碱细胞释放化学介质阻止变态反应发生。近年来研究发现TNL在体外实验中可抑制多种类型基质成纤维细胞(如:眼、肾、肝、肺成纤维细胞)的增殖及胶原合成作用。在内脏纤维化动物模型中经口服给药TNL可减缓内脏纤维化疾病的程度,并认为作用机理可能与TGFβ1/Smad3细胞内转导途径有关。 皮肤病理性瘢痕主要是皮肤创伤后细胞外基质(ECM)异常沉积的结果,TNL是否可以通过抑制ECM沉着干预病理性瘢痕的预后呢? 研究方法 体外实验:在体外培养的中华仓鼠的肺(V79)成纤维细胞及人皮肤增生性瘢痕原代培养的成纤维细胞(HF)中,观察不同浓度的TNL对其增殖活性的影响。用血小板衍生生长因子(PDGF)刺激HF细胞,提高细胞增殖活性,观察TNL对HF细胞增殖活性的影响。用MTT法测定干预后细胞增殖活性,逆转录PCR方法测定TGFβ1、Smad3、Smad7的表达情况。 体内实验:建立兔耳增生性瘢痕模型。在模型中采用测量瘢痕厚度变化、HE染色、苦味酸.天狼星红染色、Ⅰ/Ⅲ胶原含量测定,观察TNL混悬液局部注射对瘢痕形成的影响。 研究结果 TNL能有效地抑制体外培养的V79细胞的增殖活性,其作用呈量效依赖关系。TNL对原代培养的HF细胞增殖活性无明显影响。在PDGF刺激后HF细胞增殖活性明显提高,TNL可以抑制PDGF诱导后的HF细胞的增殖活性。TNL能有效地抑制HF细胞TGFβ1、Smad3的表达水平,其抑制作用呈明显的量效关系。HF细胞中Smad7无表达,TNL对其表达水平无影响。TNL羧甲基纤维素钠混悬液(CMC-Na)局部注射兔耳增生性瘢痕可抑制瘢痕增生程度,但并不影响瘢痕的消退程度。HE染色及苦味酸-天狼星染色发现TNL能降低细胞外胶原含量,降低Ⅰ/Ⅲ型胶原比例。 研究结论 体外培养的HF及V79细胞、兔耳增生性瘢痕动物模型均可作为研究组织纤维化疾病的治疗和探索其机理的良好平台。TNL可抑制HF及V79细胞的增殖活性,通过干预TGFβ1/Smad3细胞内转导途径可有效的抑制ECM的沉着,达到抑制或减轻瘢痕增生的作用。在兔耳增生性瘢痕模型中,兔耳的中份及尖端是增生性瘢痕形成的良好部位,TNL可做成CMC-Na混悬剂并能有效的抑制兔耳瘢痕的增生程度。……   
[关键词]:曲尼司特;转移生长因子β1;成纤维细胞;皮肤病理性瘢痕;细胞内转导途径
[文献类型]:博士论文
[文献出处]:四川大学2007年