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中药材及其制剂中马兜铃酸含量测定方法的研究

黄莎莎

   中草药在我国已历经数千年,经过我们祖先祖祖辈辈的长期使用被证明是有效的,从而形成了灿烂的中医药文化。但中草药至今无法成为世界普遍认可的药物,其主要原因在于成分过于复杂,大部分无法阐明其确切的有效成分和药理作用,有的无稳定可靠的质量标准可循。近年来,马兜铃酸的致疡作用和由马兜铃酸导致的肾病引起国内外的广泛关注,使部分中草药和中成药在国外遭到禁用,中药国际化进程受到巨大影响。 含马兜铃酸的中药材中大部分已有马兜铃酸含量测定方法的文献报道,但一般是一种含测方法针对一种药材,缺乏比较系统的研究。为了更好的控制含马兜铃酸药材及其制剂中马兜铃酸的含量,需要建立一种准确可靠,简便易行,适用于多数中药材及其制剂中马兜铃酸含量测定的方法。本论文参考以往的文献,建立了一种适用性较广的马兜铃酸检测方法。目前文献中马兜铃酸的含量测定方法主要有:TLCS、HPLC、LC-MS等。其中HPLC应用的最多,对照多选用马兜铃酸Ⅰ(A)、马兜铃酸Ⅱ(B)。本课题分别对TLCS、HPLC的最低检测限进行考察,结果表明,HPLC法的检测限大大低于TLCS法的检测限,考虑到样品中马兜铃酸的含量差异大,部分样品含量较低,所以在本课题中,重点对HPLC法测定马兜铃酸A含量进行系统的研究。 本文对马兜铃酸含量测定的方法进行了系统的研究,对提取溶剂、提取方法、提取时间进行了考察,选择甲醇-甲酸(98:2)为提取溶剂,采用加热回流2小时的方法进行提取。通过马兜铃酸Ⅰ、马兜铃酸Ⅱ的分离度,理论塔板数确定选用的流动相为乙腈-0.3%碳酸铵溶液(用稀盐酸调pH值7.5)(25:75),确定检测波长为250 nm。 方法学研究中,按照《中国药典》2005年版一部附录新增的“中药质量标准分析方法验证指导原则”,首先对马兜铃酸A的线性范围进行考察,结果表明马兜铃酸A进样量在1ng~511ng之间,峰面积值与马兜铃酸A的量呈较好的线性,r=1.0000。其次对方法的重复性、中间精密度、重现性,加样回收率、耐用性等进行考察。该方法重复性、中间精密度试验结果的RSD分别为1.25%、1.45%,重现性试验结果相对偏差为3.70%;重复性、加样回收试验中,按“中药质量标准分析方法验证指导原则”的要求,对范围进行考察,重复性试验样品的取样量从0.25~0.75g,加样回收试验对照品的加入量为0.20~0.30 mg,平均加样回收率为100.9%,RSD为2.09%。耐用性试验从变化流动相组成比例及流动相pH值、选用不同的色谱柱等方面对建立的方法进行耐用性试验,试验结果说明建立的方法。试验结果表明,所建立的方法专属、灵敏、准确、耐用性较好,能够满足中药材及其制剂中马兜铃酸含量测定的要求。 对采集及收集到的马兜铃属及细辛属具有法定中药材标准的22个中药材样品进行了品种鉴定,再采用建立的HPLC法对其中的马兜铃酸A进行测定,试验结果表明所建立的方法专属、准确、灵敏,适用性广,完全可以满足中药材中马兜铃酸含量测定的要求。根据试验测得的各个药材含马兜铃酸的量结合文献报道的马兜铃酸安全剂量,计算出了药材的每日最大摄入量,为相关品种的安全评价提供重要的参考。测定的药材中苕叶细辛Asarum caudligelellum C.Y.cheng et C.S.Yang和山慈姑Asarum sugittarioidcs C.F.Liang2种已有法定药材标准的马兜铃科药材的含量测定均未见文献报道。 建立了HPLC方法测定含有马兜铃科马兜铃属朱砂莲药材的成药朱砂莲胶囊中马兜铃酸A的含量并进行了方法学验证。应用建立的方法测定了两个厂家6批样品中马兜铃酸A的含量。 本课题的研究结果可以为含马兜铃酸的中药材以及中成药质量标准的建立及技术审评提供科学依据,具有重要的应用价值。……   
[关键词]:马兜铃酸;马兜铃属;细辛属;含量测定;高效液相色谱
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:四川大学2007年