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L.casei Zhang抗感染及免疫协同作用的研究

张七斤

   本研究用L.casei Zhang活菌液、活菌体及其代谢产物进行体外抑菌试验,再用其悬浮液饲喂小鼠后用大肠杆菌O157和K88菌株攻毒,观察发病情况,攻毒4d后取对照组和喂菌组未死亡的小鼠的肠内容物,用选择性培养基分离、纯化大肠杆菌和乳杆菌,将分离到的菌株,提取DNA、进行ERIC-PCR扩增、凝胶电泳分析,再进行L.casei Zhang对鸡胚肠细胞的粘附试验。结果表明L.casei Zhang活菌液及其代谢产物都有较强的抑菌活性,而活菌体没有抑菌活性,代谢产物热稳定性较好,能耐受115℃的高温,但抑菌活性受pH值的影响较大,随着pH值的降低抑菌活性逐渐升高,在弱酸和中性条件下失去抑菌活性,代谢产物的抑菌活性受胃蛋白酶和胰蛋白酶的影响不大。在体内抗感染试验中L.casei Zhang对小鼠起到了保护作用,并且在停止饲喂L.casei Zhang的第4天,从小鼠肠道内分离到L.casei Zhang,说明所饲喂的L.casei Zhang可以在小鼠肠道内定植,由于L.casei Zhang对致病菌的拮抗作用使所攻的大肠杆菌数量下降,在饲喂组未分离到大肠杆菌O157和K88菌株。L.casei Zhang能够粘附鸡的肠细胞。 本研究再用L.casei Zhang制成活菌数为2.0~3.0×1010cfu/ml的乳悬浮液(菌液)和活菌数为2.0~3.0×106cfu/ml的发酵乳,并按不同剂量灌服小白鼠。在灌服的第5、10、15、20、25、30天6个时间点用ELISA试剂盒测定小白鼠血清IgG含量和肠粘膜粘液SIgA含量,选择10、20、30天3个时间点用流式细胞仪测定小白鼠外周血T细胞CD3+、CD4+、CD8+亚群及其比值的变化。结果表明:灌服L.casei Zhang菌液及发酵乳的小白鼠血清中的IgG含量和肠粘膜粘液中SIgA含量比未饲喂乳杆菌的对照组显著或极显著提高(p<0.05,p<0.01),并且菌液组与发酵乳组之间、各剂量组之间也有显著或极显著差异(p<0.05,p<0.01)。随着时间的延长IgG含量和SIgA含量具有上升的趋势。L.casei Zhang菌液和发酵乳灌服给小白鼠后均提高了小白鼠外周血中CD3+、CD4+、CD8+T细胞的比例,优化了T细胞CD4+/CD8+亚群的比值,数据统计处理结果显示,与未饲喂乳杆菌的对照组相比差异显著(p<0.05)或极显著(p<0.01)。说明L.casei Zhang能够增强小白鼠的体液免疫功能和细胞免疫功能。 将1日龄雏鸡分两大组,以不同的剂量灌服L.casei Zhang活菌液和死菌液,两大组分别按常规免疫程序进行新城疫疫苗(IV系)滴鼻点眼免疫,禽流感病毒(H5)油乳剂灭活疫苗皮下注射免疫,在二免后的第7天和14天检测血凝抑制(HI)效价。结果表明,与未饲喂乳杆菌的对照组相比,试验各组抗体水平均提高到显著或极显著水平(p<0.05,p<0.01)。说明L.casei Zhang与新城疫疫苗和禽流感病毒(H5)油乳剂灭活疫苗有很好的免疫协同作用,能够促进雏鸡免疫功能。 本研究还用L.casei Zhang肽聚糖和DNA添加到新城疫油乳剂灭活疫苗和禽流感病毒(H5)油乳剂灭活疫苗,制成肽聚糖佐剂和DNA佐剂新城疫油乳剂灭活疫苗和禽流感病毒(H5)油乳剂灭活疫苗,按常规免疫程序分别免疫雏鸡,在二免后的第7天和14天检测血凝抑制(HI)效价。结果表明,肽聚糖佐剂和DNA佐剂新城疫油乳剂灭活疫苗和禽流感病毒(H5)油乳剂灭活疫苗组与对照组相比,试验各组抗体水平均提高到显著或极显著水平(p<0.05,p<0.01),说明L.casei Zhang肽聚糖和DNA具有良好的免疫增强作用,是良好的免疫佐剂。……   
[关键词]:L.casei Zhang;抗感染;肠道菌群;粘附;IgG;SIgA;T细胞亚群;肽聚糖;CpG序列
[文献类型]:博士论文
[文献出处]:内蒙古农业大学2006年