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鸭肝炎病毒的分离鉴定及ELISA检测抗原、抗体方法的建立

韩永俊

   鸭病毒性肝炎(Duck virus hepatitis,DVH)是6周龄以下雏鸭的一种急性、接触性、高度致死性的烈性传染病,病原为鸭肝炎病毒(Duck hepatitis virus,DHV)。该病在国内雏鸭群中频频发生,给养禽业生产造成了极大的损失。本实验从一群发病鸭的病料中分离到一株鸭肝炎病毒,并建立了检测鸭肝炎病毒抗原和血清抗体的ELISA快速检测方法,取得了如下结果: 1.鸭病毒性肝炎病毒株的分离鉴定及部分理化特性的研究 对湖北省内某疑似鸭病毒性肝炎感染鸭病料的收集,通过细菌分离、病毒分离、中和试验、动物回归试验、雏鸭保护试验以及病毒的电镜观察,分离到一株鸭病毒性肝炎Ⅰ型病毒株,对分离毒株的部分生物学特性进行了初步研究。 2.鸭病毒性肝炎血清抗体ELISA快速检测方法的建立和初步应用 将通过鸭胚传代的病毒经过纯化后,作为包被抗原,建立了一种检测血清中DHV抗体的间接ELISA方法。通过对ELISA反应条件的系列测定,确定了各组分的最适工作条件:抗原包被浓度为3.75μg,血清稀释约1∶160时,阳性血清OD450值(P)接近1.0,阴性血清值(N)为0.125,P/N值最大.阴性和阳性分界明显;通过对40份阴性鸭血清的检测结果,确定阴阳性临界点为0.2。根据建立的ELISA方法及最佳反应条件,检测了一批雏鸭携带母源抗体及其消长情况以及一批免疫雏鸭的抗体消长情况。结果表明,本试验建立的间接-ELISA法可用于鸭血清中鸭肝炎病毒抗体水平的检测以及未免疫鸭群鸭病毒性肝炎感染情况的检测。 3.鸭病毒性肝炎病毒双抗体夹心ELISA快速检测方法的建立和初步应用 以纯化的鸭抗DHV IgG为包被抗体,兔抗DHV IgG为第二抗体,通过ELISA反应条件的优化选择,建立了检测DHV抗原的夹心ELISA法。结果表明,鸭抗DHV IgG的最佳包被浓度为约2μg/ml,兔抗DHV IgG的最适工作浓度约为3.4μg/ml;与已知鸭病毒性肝炎标准病毒呈强阳性反应,与已知的阴性样品及其它禽类病毒(NDV、IBV、DP、MDPV、IBDV、MDV)无交叉反应;用建立的ELISA方法对97份疑为鸭肝炎的病料进行了检测,结果有73份呈阳性。经过比较测定,夹心ELISA法要比琼脂免疫扩散方法要敏感64倍,说明本方法在检测鸭病毒性肝炎病毒抗原方面具有特异性强、敏感性高的特点。……   
[关键词]:鸭病毒性肝炎;鸭肝炎病毒;分离鉴定;酶联免疫吸附试验;抗原;抗体
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:华中农业大学2007年