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鸡腿蘑深层发酵技术及其多糖分离纯化的研究

胡梅

   鸡腿蘑Coprinus comatus是一种味道鲜美、营养丰富、食药兼用的大型真菌。鸡腿蘑多糖具有降血糖、提高免疫活性、抗肿瘤等作用。目前它已被定为符合联合国粮农组织(FAO)和世界卫生组织(WHO)要求的集“天然、营养、保健”三种功能为一体的16种珍稀食(药)用真菌之一。由此可见,鸡腿蘑是一种极具开发潜质和应用前景的食(药)用真菌。本试验选择鸡腿蘑作为研究对象,对它的深层发酵技术及其多糖的提取和分离纯化进行了研究,主要研究结果如下: 1、通过单因素和正交试验,确定鸡腿蘑发酵优化培养基配方为:玉米淀粉4.0%,黄豆饼粉0.2%,蔗糖3.0%,KH_2PO_4 0.1%,MgSO_4 0.1%,CaSO_4 0.05%,玉米浆0.5%。 2、确定摇瓶发酵条件为:起始pH6,转速170r/min,装量系数为0.4,接种量10%。利用优化后的发酵培养基和培养条件进行发酵周期试验,发酵时间为6d,此时胞外多糖含量可达1.46g/L,生物量可达17.70g/L。pH在整个发酵周期中由初始的6.05降到5.43,变化不大。通过50L发酵罐试验发现在发酵120h时,镜检菌丝开始老化,即中止发酵。此时测定生物量为15.70g/L,胞外多糖含量为1.24g/L。 3、通过一系列单因素试验,确定鸡腿蘑发酵上清液胞外多糖的提取条件为:将发酵上清液pH调整至5,然后加入等体积无水乙醇,置于15℃温度下醇析24h。在此条件下,胞外多糖得率为0.18%。通过L_9(3~4)正交试验确定了鸡腿蘑菌丝体胞内水溶性多糖的提取条件为:湿菌丝体匀浆后微波处理3min,然后按料水比1:2加水,在55℃水浴中抽提6h,提取液用无水乙醇醇析。在此条件下,胞内水溶性多糖得率约为1.03%。 4、采用Sevag法除蛋白,透析法脱盐对鸡腿蘑粗多糖进行初步纯化,并利用L_9(3~4)正交试验确定了Sevag法去蛋白的条件为:V_(样品):V_(氯仿+正丁醇)=1:1,V_(氯仿):V_(正丁醇)=5:1,振荡时间为30min。在此条件下,粗多糖中蛋白去除率约为69%。 5、通过DEAE-纤维素32柱层析对经过初步纯化的鸡腿蘑粗多糖进行了分级分离,用去离子水、NaHCO_3、NaOH洗脱时,发酵液胞外粗多糖(CEP)和菌丝体胞内粗多糖(CMP)都分别至少含有3个多糖组分,其中CEP-Ⅱ(酸性多糖)和CMP-Ⅰ(中性多糖)占大部分。然后把CEP-Ⅱ和CMP-Ⅰ分别用Sephadex G-200凝胶过滤色谱再进行分级分离,又分别得到分子量大小十分接近的两个组分CEP-Ⅱ-1、CEP-Ⅱ-2和CMP-Ⅰ-1和CMP-Ⅰ-2,其中CEP-Ⅱ-1与CEP-Ⅱ-2所占比例接近,分别占54%和46%;而CMP-Ⅰ-1和CMP-Ⅰ-2中CMP-Ⅰ-1占81%。……   
[关键词]:鸡腿蘑;食(药)用真菌;深层发酵;多糖;提取;分离纯化
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:华中农业大学2006年