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皮质醇和壳聚糖对黄颡鱼免疫机能及生长的影响

葛海燕

   本论文以黄颡鱼为实验对象,利用皮质醇长期混饲投喂的方法,模拟自然发生的应激反应。实验分别按0mg/kg(对照)、10mg/kg、100mg/kg 3个浓度进行皮质醇混饲投喂,日投饵率为3%,在投喂后第1、2、3、4、5、6周进行采样,分别研究了外源皮质醇对黄颡鱼免疫机能以及生长的影响。实验结果对了解应激激素皮质醇影响黄颡鱼抗病力和生长的机制以及指导黄颡鱼健康养殖都具有重要意义。此外,还通过腹腔注射的方法研究了壳聚糖这一免疫刺激剂对黄颡鱼非特异性免疫机能的影响,为今后养殖生产中筛选有效的免疫刺激剂,提高鱼体自身免疫力,缓减慢性应激造成的免疫力低下提供参考依据。 通过对黄颡鱼血清皮质醇水平的测定发现:各周对照组血清皮质醇含量均无显著性差异,平均值为(8.09±1.83)ng/ml,说明养殖环境是安静的,满足应激实验条件。实验结果显示,从投喂第2周开始10mg/kg剂量组和100mg/kg剂量组与对照相比,血清皮质醇含量始终显著升高(P<0.05)。其中投喂第2、5、6周两个剂量组与对照组相比,都呈极显著性差异(P<0.01)。整个实验过程中,10mg/kg剂量组黄颡鱼血清皮质醇浓度上升水平虽不及同期100mg/kg剂量组高,但两剂量组上升趋势基本相同,且无显著差异。结果表明,采用皮质醇混饲投喂的方法可模拟自然发生的应激反应,使血清皮质醇持续升高。 在皮质醇混饲投喂期间,通过测定黄颡鱼脾脏脏器系数、血清溶菌酶活性、血清补体活性、外周血白细胞数量、头肾吞噬细胞呼吸爆发功能等指标,分析了外源皮质醇对黄颡鱼免疫机能的影响。结果显示:(1)外源皮质醇对黄颡鱼脾脏造成严重损伤,从第2周开始皮质醇投喂组与对照组相比脾脏脏器系数显著下降(P<0.05)。(2)外源皮质醇对头肾吞噬细胞的杀菌能力产生显著抑制作用,从第2周开始静息头肾吞噬细胞还原NBT的能力以及PMA刺激后黄颡鱼头肾吞噬细胞产生呼吸爆发的能力显著下降(P<0.05)。(3)外源皮质醇可促使血清溶菌酶活性显著升高,从第3周开始皮质醇投喂组与对照组相比出现显著性差异(P<0.05)。(4)外源皮质醇可使血清替代途径补体活性ACHso值显著性下降,10mg/kg剂量组在投喂第2、5、6周显著低于对照组(P<0.05),100mg/kg剂量组从第2周开始一直都极显著低于同期对照组(P<0.01)。(5)外源皮质醇导致外周血白细胞总数和淋巴细胞百分比从投喂第2周就显著性下降(P<0.05);嗜中性粒细胞百分比增高,与对照组相比10mg/kg剂量组在投喂第2、4周出现显著性差异(P<0.05),100mg/kg剂量组在投喂第2、6周出现显著性差异(P<0.05);单核细胞百分比呈上升趋势,100mg/kg剂量组在投喂第5、6周显著性高于对照组(P<0.05)。以上结果表明,应激激素皮质醇在黄颡鱼体内作用1周后,脾脏脏器系数、头肾吞噬细胞呼吸爆发功能、血清补体活性以及外周白细胞数量都显著下降,说明皮质醇对黄颡鱼免疫机能产生了抑制作用,但血清溶菌酶活性和嗜中性粒细胞百分比的显著升高提醒我们,皮质醇对免疫机能影响的机制是非常复杂的,不能仅从某一指标的升高或降低就定论皮质醇对鱼体免疫机能是促进还是抑制。 在研究皮质醇混饲投喂对黄颡鱼生长影响的实验中,对采样各周的黄颡鱼体重、血糖、肝糖原进行了测定,并对混饲投喂第6周的黄颡鱼肠道进行了组织学切片观察。结果显示:(1)外源皮质醇使黄颡鱼体重下降。从第2周开始10mg/kg剂量组和100mg/kg剂量组黄颡鱼体重始终低于同期对照组,且10mg/kg剂量组在第3周、100me/kg剂量组在第6周体重显著低于同期对照组(P<0.05)。(2)外源皮质醇使黄颡鱼血糖从第1周就显著升高(P<0.05);而使肝糖原含量下降,整个实验期间皮质醇投喂组肝糖原含量一直低于对照组,且在投喂第2、6周有显著性差异(P<0.05)。(3)组织学观察发现,外源皮质醇可使黄颡鱼肠道粘膜皱襞减少、上皮细胞脱落。实验结果表明,外源皮质醇可通过损害肠道粘膜皱襞、促进肝糖原分解和糖异生作用,使黄颡鱼初期生长受阻,后期停止生长,体重下降。 在研究壳聚糖对黄颡鱼非特异性免疫机能影响的实验中,按2mg/尾的剂量腹腔注射壳聚糖,注射后第2、4、6、10d采样,对头肾NBT阳性细胞数量、头肾吞噬细胞吞噬百分比和吞噬指数、血清补体活性以及血清溶菌酶活性、外周血各类白细胞百分比进行了测定,研究发现:(1)壳聚糖可提高黄颡鱼头肾吞噬细胞的吞噬、杀菌活性,但对头肾吞噬细胞趋化性无显著影响。头肾吞噬细胞的吞噬百分比和吞噬指数在注射第4、6d出现极显著增高(P<0.01),头肾NBT细胞数量从注射第2d开始始终极显著高于对照组(P<0.01)。(2)壳聚糖可增强黄颡鱼血清溶菌酶和补体活性。血清溶菌酶和补体活性都从注射第2d开始升高,第4d出现极显著差异(P<0.01),此后开始下降。(3)壳聚糖可提高黄颡鱼外周血嗜中性粒细胞百分比,但对血液中淋巴细胞百分比、单核细胞百分比无显著性影响。外周血嗜中性粒细胞百分比在注射第2、4、6d呈极显著升高(P<0.01)。……   
[关键词]:皮质醇;壳聚糖;黄颡鱼(Pelteobagrus fulvidraco R.);免疫机能;生长
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:华中农业大学2007年