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猪源益生乳酸菌的筛选及发酵工艺研究

沈中艳

   从健康猪粪便筛选分离到有较强抑菌特性的3株乳酸菌,主要生理生化实验和16S rDNA保守序列分析初步鉴定为干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)、屎肠球菌(Enterococcus faecium)和粪肠球菌(Enterococcus faecalis)。体外益生特性研究表明,3株乳酸菌能耐受胃肠道环境,黏附猪小肠表面粘液,对猪源产肠毒素型大肠杆菌Escherichia coli O139、E.coli C83905、E.coli C83524、E.coli C83529,伤寒沙门氏菌Salmonella typhimurium O4Hi、金黄色葡萄球菌Staphylococcus aureus均有较强的抑制特性。小鼠试验证明3株乳酸菌安全可靠。对添加乳酸菌后小白鼠大肠杆菌数量的变化进行了研究,结果表明对照较添加乳酸菌组大肠杆菌数量明显降低(P<0.05)。用E.coli C83905腹腔攻毒小白鼠,乳酸菌组的死亡率明显低于对照组。 通过单因素试验确定3株乳酸菌最适合的碳氮源、营养因子、缓冲盐以及最佳接种量、温度、起始pH、装液量;应用均匀设计法结合二次多项式回归分析,筛选了E.faecalis的增菌培养基组分:蔗糖1.5%,酵母膏3.0%,磷酸盐缓冲液50%,MgSO_4·7H_2O 0.0058%,MnSO_4·4H_2O 0.025%,番茄汁15%,pH6.8。该菌株在此增菌培养基37℃下培养18h,菌数可达到8.0×10~9 cfu/mL,增殖效果是经MRS培养后的3倍。进一步流加碱液控制培养基pH,18h后E.faecalis菌数可达到9.0×10~9cfu/mL。 研究了蔗糖、乳糖、L-谷氨酸、半胱氨酸、脱脂奶粉、甘油、维生素C、壳聚糖、海藻糖等对E.faecalis的冷冻干燥保护效果,结果发现:单一保护剂使用时,海藻糖保护效果最好,菌株冻干存活率为74%;脱脂乳、蔗糖和山梨醇协同作用时,冻干保护效果略优于海藻糖(P<0.05),冻干存活率为78%。常温常压状态下五个月,3株乳酸菌E.faecium、E.faecalis和L.casei的冻干菌粉,活菌数存活率分别为68.5%、70.2%和65.8%,表明乳酸菌冻干菌粉的保存性较好。 将这3株乳酸菌分别发酵,按菌数为1:1:1混合,真空冷冻干燥后,用于仔猪饲养实验。选取64头(杜×长×大)仔猪,分为5组:基础日粮对照组、抗生素对照组、乳酸菌高、中、低剂量试验组。通过平均增重、料肉比、发病情况(仔猪腹泻发病率及程度、死亡率等)探讨乳酸菌益生素的作用效果。结果表明,乳酸菌高低剂量组采食量、平均增重高于无抗组和抗生素组;乳酸菌组料肉比大于抗生素组;乳酸菌益生素能够预防仔猪腹泻、提高仔猪成活率和改善饲养环境。……   
[关键词]:猪源乳酸菌;筛选;鉴定;高密度培养;冷冻干燥保护剂;生产性能
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:华中农业大学2007年