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鹌鹑α-干扰素及热休克蛋白HSP70 cDNA克隆与表达

苏丁丁

   近年来随着养殖规模的扩大和集约化程度的不断提高,禽病的种类也越来越多,其危害也越来越严重,目前流行严重的禽病毒性疾病主要有禽流感、鸭瘟、新城疫等。我国是一个养鹌大国,无论是鹌鹑的品种还是数量都排在世界前列,但是,禽流感等病毒病严重威胁着养鹌业的进一步发展,而采用单一的疫苗免疫效果并不理想,化学药物以及抗生素治疗容易导致环境问题以及危害人类健康。干扰素系统是机体对抗病毒感染的重要防御系统,HSP70作为分子伴侣的作用对组织、细胞的保护作用也广泛应用于临床医学。本研究对鹌鹑α-干扰素和HSP70 cDNA进行克隆、原核表达,为鹌鹑分子疫苗研究奠定基础。 试验通过新城疫(NDV)强毒疫苗刺激鹌鹑外周淋巴细胞提取总RNA,应用RT-PCR法扩增出鹌鹑α-干扰素(CoIFN-α)cDNA,用特异性引物连接至原核表达载体pET28a(+),构建原核表达载体pET28a-CoIFN-α,进行表达、测序和SDS-PAGE分析。通过热刺激诱导鹌鹑外周淋巴细胞提取总RNA,应用RT-PCR克隆鹌鹑HSP70cDNA,用外引物扩增COHSP70,进行测序分析后用内引物进一步进行PCR扩增,并将产物克隆至pET28a(+),构建原核表达载体pET28a-CoHSP70,并进行表达和SDS-PAGE分析。 本研究成功克隆到CoIFN-a cDNA,序列分析得其全长为641bp,编码192个氨基酸;它与日本鹌鹑IFN-α(AB154298.1)具有100%的同源性;SDS-PAGE分析表明该蛋白在大肠杆菌BL21中有一定表达;成功克隆COHSP70 cDNA,序列分析得其全长为2341bp,编码643个氨基酸;它与日本鹌鹑日本鹌鹑HSP70(AB262971.1、AB259847.1)序列比较,具有99%的同源性;SDS-PAGE分析表明该蛋白在大肠杆菌BL21中较好表达,其分子量为70KD左右。……   
[关键词]:α干扰素;热休克蛋白70;cDNA克隆;原核表达;鹌鹑
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:湖南农业大学2007年