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抗猪传染性胃肠炎病毒S蛋白单克隆抗体的制备与鉴定

张赟硕

   分别用昆虫细胞杆状病毒表达系统表达的重组猪传染性胃肠炎病毒(Transmissible gastroenteritis virus,TGEV)S蛋白和含有猪传染性胃肠炎病毒TH-98株S基因主要抗原位点的重组质粒PCI-Sa免疫BALB/c小鼠,按常规方法进行细胞融合。间接ELISA方法进行筛选,前者筛选抗原为TGEV细胞培养物上清;后者筛选抗原为纯化的乳酸乳球菌表达重组TGEV S蛋白。采用有限稀释法,经过三次克隆,最终前者获得两株抗TGEV S蛋白的杂交瘤细胞株(C7C882和B5G8G7);后者获得一株抗TGEV S蛋白的杂交瘤细胞株(E6D9A12)。三株杂交瘤细胞分泌的单克隆抗体亚类分别为IgM、IgM、IgG2a类,杂交瘤细胞体外长期培养和冻存均不影响抗体的分泌。杂交瘤细胞的平均染色体数为88±10对,用相应的筛选抗原经间接ELISA检测C7C882、B5G8G7、E6D9A12细胞培养上清的抗体效价分别为1:200、1:100、1:500,腹水抗体效价分别为1:2×10~5、1:1×10~4、1:6×10~5。 以猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪轮状病毒(PRV)、猪伪狂犬病病毒(PrV)细胞培养物上清液为抗原,与三株杂交瘤细胞上清经间接ELISA检测结果显示,这三株单抗与TGEV显示良好的特异性,而与PEDV、PRV和PrV不存在交叉反应。说明获得的单抗具有高度的特异性。 用实验获得的单克隆抗体和SP2/0细胞培养上清对感染TGEV的ST细胞培养物进行了间接免疫荧光检测病原的比较研究:间接免疫荧光染色后,与单抗作用的细胞培养物中,多数细胞在其胞浆和细胞膜上出现黄绿色闪亮荧光,且荧光强度强,与SP2/0细胞培养上清作用的细胞培养物未见有黄绿色闪亮荧光,结果表明,利用所制备的抗TGEV S蛋白的单克隆抗体进行间接免疫荧光对病原检测具有较高的特异性。 以纯化的TGEV为抗原,Dot-ELISA检测实验获得的单克隆抗体与TGEV的反应性,结果三株杂交瘤细胞上清与TGEV反应均出现灰色印记,可判定为阳性;与SP2/0细胞上清反应为阴性。证明单克隆抗体与TGEV具有特异性反应。 上述实验结果均表明,所制备的抗TGEV S蛋白的单克隆抗体对病原检测具有较强的特异性,为TGEV病原特性的基础性研究和病原的快速检测提供了重要的物质基础。……   
[关键词]:猪传染性胃肠炎病毒;重组S蛋白;单克隆抗体;间接ELISA;间接免疫荧光
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:东北农业大学2007年