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H5N1-NS1基因的融合表达及RNAi技术抑制BmNPV增殖的研究

刘波

   禽流感是由A型流感病毒引起的一种禽类感染的疾病综合症,是危害目前养禽业最严重的疫病之一。已有研究表明H5N1-NS1蛋白可以作为诊断试剂来鉴别诊断免疫动物和自然感染动物,因而开展NS1蛋白的研究在禽流感防治方面具有较高的应用价值。 本研究将人工合成的H5N1-NS1基因克隆进原核表达载体pET-28a(+)中,在大肠杆菌BL21中诱导表达,结果表明:大肠杆菌中表达的重组蛋白分子量为31 kD,与理论值相符,此外还有一条分子量为15 kD左右的特异性条带,推测与大肠杆菌密码子的偏爱性或表达产物降解有关;同时将H5N1-NS1基因克隆进杆状病毒转移载体pFastBacHT A中,通过Bac to Bac系统在Sf-9细胞中进行表达,表达的重组蛋白为33 kD,比预测的融合蛋白分子量30.5 kD略大,推测与表达产物的后加工有关。 开展了基于DNA载体的RNAi抑制家蚕核多角体病毒(BmNPV)复制的研究。用人工合成“A3 promoter-Sence lef-1-TCAAGAG-Antisence lef-1-TTTTT-polyA signal”的结构元件,构建基于piggyBAC转座子的piggy-A3-lefl-neo转基因载体,转染piggy-A3-lefl-neo的BmN细胞,对BmNPV的增殖有明显的抑制效果。转染piggy-A3-lefl-neo的BmN细胞,经G418筛选两个月后,获得了阳性率为70%的转基因细胞,试验表明,该转化细胞对BmNPV有较好的抗性。……   
[关键词]:NS 1基因;表达;RNAi;lef 1基因;BmNPV
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:苏州大学2007年