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去甲肾上腺素对血管平滑肌细胞表型转化和增殖的影响及机制研究

焦磊

   研究目的: 本课题通过研究NE对血管平滑肌细胞表型转化和增殖的影响及作用机制,为进一步探讨神经因素对VSMC表型转化和增殖作用打下基础。 实验方法: 取健康SD大鼠腹主动脉作原代培养,用第五代的细胞做实验。 实验一:实验分为A:正常对照(control)组;B:NE(5×10-5.mol/L)作用组;C:NE+OX-LDL(5×10-5mol/L、50ug/ml)作用组;D:OX-LDL(50ug/ml)作用组。用0.5%血清饥饿同步化24小时后,各组换成无血清培养液并分别加入相应药物,作用24小时后收集细胞。用于免疫细胞化学检测的细胞,取出前24小时用5-Brdu(8×10~(-4)mol/l)标记,其它用于RT-PCR检测SM22amRNA和HRG-1mRNA的表达。 实验二:实验分为A:72小时对照组;B:正常对照(control)组;C:NE(5×10-5mol/L)作用组;D:NE+OX-LDL(5×10-5mol/L、50ug/ml)作用组;E:OX-LDL(50ug/ml)作用组。用0.5%血清饥饿同步化24小时后,各组换成10%胎牛血清DMEM培养基培养72小时后,弃培养液换成无血清培养液(此时72小时对照组终止培养收集细胞),在C、D、E组中分别加入相应药物,作用48小时后收集细胞,其它用于RT-PCR检测SM22amRNA和HRG-1mRNA的表达。 实验三:实验分为A:正常对照(control)组;B:a1-R~-(10~(-4)mol/l)+NE(5×10~(-4)mol/l)作用组;C:β1-R~-(10~(-4)mol/l)+NE(5×10~(-4)mol/l)作用组;D:NE(5×10~(-4)mol/l)作用组。用0.5%血清饥饿同步化24小时后,各组换成无血清培养液并分别加入相应药物,作用24小时后收集细胞。用于免疫细胞化学检测的细胞,取出前24小时用5-Brdu(8×10~(-4)mol/l)标记,其它用于其它用于RT-PCR检测SM22amRNA和HRG-1mRNA的表达。 结果: 1.NE对血管平滑肌增殖的作用 NE和OX-LDL作用收缩型平滑肌细胞后,有下调HRG-1基因的表达,两者共作用下调更明显:Brdu标记也见其标记增殖细胞增多;而当NE和OX-LDL作用合成型平滑肌细胞时,NE能上调HRG-1基因,而OX-LDL则不能。这一结果表明NE对血管平滑肌的增殖有调控作用,而OX-LDL对平滑肌的增殖作用是不可逆的。而a1-R~-+NE和β1-R~-+NE组HRG-1mRNA的表达与NE作用组相比明显增多,Brdu标记增殖平滑肌细胞也大大减少,说明NE引起的血管平滑肌增殖是通过a1-R和β1-R起作用。 2.NE对血管平滑肌表型转化的作用 正常血管平滑肌都表达SM22a mRNA,NE和OX-LDL作用收缩型血管平滑肌后,SM22a mRNA表达都下调。而NE和OX-LDL作用合成型血管平滑肌时,NE对SM22a mRNA的表达有明显上调作用,OX-LDL则没有上调作用,这一点与对平滑肌的增殖作用是相吻合的;OX-LDL对合成型平滑肌的表型转化作用也是不可逆的。 结论: 1.NE可促收缩型血管平滑肌表型向合成型转化和增殖作用;对合成型血管平滑肌表型转化和增殖作用有回调作用,说明NE具有象神经调控样的可逆性调控作用。 2.OX-LDL可促收缩型血管平滑肌表型向合成型转化和增殖作用:对合成型血管平滑肌表型转化和增殖没有看到象NE的回调作用,说明OX-LDL对血管是一种不可逆的作用。 3.通过阻断a1-R和β1-R信号,完全可阻断NE对血管平滑肌表型转化和增殖作用,由此说明用NE对血管平滑肌表型转化和增殖作用是通过a1-R和β1-R来实现。 4.对NE具有象神经调控样的可逆性调控作用,有必要作进一步更深入的研究。……   
[关键词]:去甲肾上腺素;表型转化;高血压相关基因-1;平滑肌22α;细胞增殖
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:苏州大学2007年