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痹肿消汤对胶原诱导性关节炎大鼠滑膜组织annexin 1、aldolase A表达的影响

何国雄

   目的: (1)观察胶原诱导性关节炎(collagen-induced arthritis,CIA)大鼠滑膜组织膜联蛋白1(annexin 1)、醛缩酶A(aldolase A)表达,探讨类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)的发病机制; (2)分析痹肿消汤对胶原诱导性关节炎大鼠滑膜组织膜联蛋白1(annexin 1)、醛缩酶A(aldolase A)表达的影响,探讨痹肿消汤治疗RA的作用机理。 方法: (1)采用牛Ⅱ型胶原(bovineⅡcollgen,BⅡC)混合完全弗氏佐剂(complete Freund s adjuvant,CFA)皮下注射大鼠复制实验性关节炎动物模型。模型成功后随机分为两组,一组为痹肿消汤组(n=19,简称治疗组),灌服BZXD,另一组为CIA模型组(n=17,简称模型组),灌服等剂量蒸馏水。正常对照组(简称正常组,n=15)大鼠不作处理。 (2)观察三组大鼠一般情况、关节炎指数积分、足爪肿胀度、发病率及肢体累及率观察、病理形态学改变。在免疫后第10天、15天、20天、25天、30天、35天、40天、45天分别记录大鼠关节炎指数积分;每周测体重及足爪肿胀程度;在免疫后第25天、35天、45天分批处死大鼠,用HE染色法观察各组踝关节病理形态学改变。 (3)采用免疫印迹法(Western blotting)检测模型组、痹肿消汤组及正常组大鼠在不同时间点滑膜组织中annexin 1、aldolase A的表达,运用Imagetool 3.0灰度扫描软件对结果进行半定量分析,比较组间及组内差异,并将annexin 1、aldolase A的表达作直线相关分析。 结果: 1.CIA模型复制:采用BⅡC混合CFA皮下注射SD大鼠成功复制CIA模型,成功率达88.2%。 (1)一般情况观察:模型组大鼠精神欠佳,饮食减少,平均体重较治疗组轻(P<0.05),体毛欠光泽,后期可见毛发枯燥,治疗组未见以上情况。模型组大鼠于免疫后第3周、第4周、第5周、第6周体重增长较正常组缓慢(P<0.05),第1周和第2周体重增长差异无显著性(P>0.05);治疗组大鼠于第5、6周体重增长较模型组明显,差异有显著性(P<0.05),其余时间点差异不显著。 (2)关节炎指数积分评定:CIA大鼠关节炎体征于免疫后8~10天开始出现。免疫后10d,模型组,治疗组的关节炎指数积分增加。模型组于免疫后25天关节炎指数积分达到高峰,30天开始下降;治疗组大鼠AI积分与模型组比较,在免疫后15天无明显区别,差异无显著性(P>0.05),于25天左右达高峰,但仍较模型组低,差异有显著性(P<0.05)。治疗组大鼠AI积分于20天、25天、30天、35天、40天、45天均明显低于模型组(P<0.05)。 (3)足爪肿胀度测量:模型组大鼠于免疫后第2周、第3周、第4周、第5周、第6周足爪肿胀较正常组明显(P<0.05);治疗组大鼠于第5周、第6周足爪肿胀较模型组减轻(P<0.05),其余时间点差异无显著性。 (4)病理组织学观察:正常大鼠滑膜组织未见明显的新生血管及炎症细胞浸润,模型组25天有明显血管增生、滑膜增厚,炎性细胞浸润、水肿,随着关节症状的加重,新生血管逐渐增多、血管扩张、充血,大量淋巴细胞浸润。治疗组滑膜组织可见少量新生血管及炎症细胞浸润,滑膜轻度增厚,于35d后可见新生血管减少,炎症减轻,滑膜变薄。痹肿消汤能减轻CIA关节滑膜损伤。 2.各组大鼠滑膜组织annexin 1、aldolase A的表达 (1)各组大鼠滑膜组织annexin 1表达:造模25天后,模型组滑膜组织annexin 1表达低于正常组(P<0.05),随着免疫时间的延长,模型组滑膜组织annexin 1表达呈水平递减趋势,45天表达最低(P<0.05,P<0.05,P<0.01)。痹肿消汤组annexin 1表达在各时间点明显均高于模型组(P<0.05,P<0.05,P<0.01),在25天、35天、45天水平,annexin 1表达递增,45天接近于正常组水平。 (2)各组大鼠滑膜组织aldolase A的表达:模型组大鼠滑膜组织aldolase A表达在25天、35天、45天水平递增,差异明显((P<0.05,P<0.01,P<0.01),aldolase A在各时间点的表达明显高于正常组及治疗组(P<0.05,P<0.01,P<0.011)。治疗组大鼠25天滑膜aldolase A表达低于正常组(P<0.05),随着免疫时间的延长,治疗组滑膜组织aldolase A表达则逐渐下调(P<0.05,P<0.01),45天接近于正常组水平(P>0.05)。 (3)模型组与治疗组在各时间点annexin 1表达与aldolase A呈负相关。 结论: 1.以BⅡC混合CFA皮下注射SD大鼠能成功复制CIA动物模型。BZXD能明显改善CIA大鼠临床症状,减轻病变程度。 2.在CIA病理过程中,随着关节炎症状加重,annexin 1表达下调,aldolase A表达上调,滑膜annexin 1与aldolase A表达呈负相关。提示annexin 1、aldolase A与RA滑膜病变密切相关。 3.痹肿消汤可通过上调annexin 1表达,下调aldolase A表达来阻抑RA关节病变。……   
[关键词]:胶原性关节炎;滑膜炎;类风湿;关节炎;痹肿消汤;膜联蛋白1;醛缩酶A;免疫印迹
[文献类型]:博士论文
[文献出处]:中南大学2006年