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哈氏弧菌和溶藻弧菌亚单位偶联疫苗的初步研究

李华

   本试验采用十二烷基肌氨酸钠法提取不同盐浓度、不同温度下培养的哈氏弧菌(Vibrio harveyi)SpGY020601的外膜蛋白(OMPC),并应用Brandford法测定各条件下提取的蛋白浓度,采用SDS-PAGE,检测不同培养条件对OMPC表达的影响,利用Western-blotting检测不同条件下OMP中各蛋白免疫原性的变化,寻求最佳的培养条件。结果显示:28℃、1 mol/L NaCl浓度,为最佳的培养条件。采用酚水法提取溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)EpGS021001株的脂多糖(LPS),并通过碳化二亚铵(EDC)介导的缩合反应,将哈氏弧菌的OMPC与溶藻弧菌的LPS偶联。设置OMPC-LPS偶联物+β葡聚糖佐剂(DEAE)组、未偶联的哈氏弧菌OMPC+β-DEAE组、溶藻弧菌LPS+β-DEAE组、哈氏弧菌OMPC和溶藻弧菌LPS的简单混合物+β-DEAE组以及生理盐水组,按相同程序免疫卵型鲳鲹。溶菌酶含量检测、微量凝集反应试验结果显示:卵型鲳鲹经OMPC-LPS偶联物组、OMPC组、LPS组以及简单混合物组免疫后,各免疫组间血清中溶菌酶活性没有显著差异(P>0.05),但均远高于生理盐水对照组(P<0.05);OMPC-LPS偶联组的抗溶藻弧菌EpGS021001的抗体效价较单纯溶藻弧菌LPS组、简单混合组出现得早,抗体滴度高;与此类似,OMPC-LPS偶联组中抗哈氏弧菌SpGY020601的抗体效价较单纯哈氏弧菌OMPC组、简单混合组出现得早,抗体滴度高,且持续时间长;对EpGS021001、SpGY020601的攻击,OMPC-LPS偶联组保护率分别为85%和95%,高于单纯溶藻弧菌LPS组的70%、单纯哈氏弧菌OMPC组的75%,也高于简单混合组的80%、82.5%。设置OMPC-LPS偶联物组、偶联物+ISA763佐剂组、偶联物+β-DEAE组以及生理盐水组。各组分为腹腔注射攻毒与浸泡攻毒,对EpGS021001的攻击,ISA763佐剂组相对保护率分别为90%和70%,高于β葡聚糖佐剂组的85%和55%,以及无佐剂组的80%和55%;对SpGY020601的攻击,ISA763佐剂组相对保护率分别为95%和80%,高于或相当于β葡聚糖佐剂组的95%和75%,以及无佐剂组的90%和75%。提示:哈氏弧菌OMPC和溶藻弧菌LPS偶联物具有疫苗研制的潜力,且佐剂对它有增效作用,其中ISA763的增效作用高于β葡聚糖。……   
[关键词]:溶藻弧菌;哈氏弧菌;外膜蛋白;脂多糖;偶联疫苗
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:西北农林科技大学2007年