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鸡组织中三种聚醚类抗生素残留的微生物法检测研究

李娜

   本研究以大肠杆菌(CMCC(B)44103)、金黄色葡萄球菌(CMCC(B)26003)、短小芽孢杆(CMCC(B)63202)和枯草芽孢杆菌(CMCC(B)63501)四种菌为工作菌,建立了鸡组织中三种聚醚类抗生素(莫能菌素、盐霉素和马杜霉素)残留的微生物法检测研究,并应用于三种药物在鸡组织(肌肉、肝脏和肾脏组织)中的残留量研究。 1.三种聚醚类抗生素残留检测微生物学方法的建立及敏感菌的筛选 1.1最适菌层浓度和培养基最适pH值的选择 本研究通过测定不同菌层浓度和不同培养基pH值时三种抗生素对四种细菌的抑菌圈直径及清晰度来确定最适菌层浓度和培养基pH值。结果表明:当大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、短小芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌的最适菌层添加浓度分别为2%(16×10~5cfu·mL~(-1))、0.5%(10×10~6 cfu·mL~(-1))、0.12%(6×10~6 cfu·mL~(-1))和0.004%(6×10~5 cfu·mL~(-1))以及培养基最适pH值为6.5时可产生直径最大、边缘光滑、完整、清晰的抑菌圈。 1.2三种聚醚类抗生素在磷酸盐缓冲液中标准曲线的制备 本研究分别制备了三种药物对四种菌在磷酸盐缓冲液中的标准曲线,其各组标准曲线的药物浓度分别相邻浓度为2倍剂量关系的六个工作浓度。结果表明:各标准品于不同时间分别制备五组工作曲线,其斜率的变异系数均低于10%,表明其变异程度小、重复性好。对各标准品的五组工作曲线各浓度抑菌圈直径的矫正值求平均值,并以此绘制标准曲线,抑菌圈直径与药物浓度的对数值呈良好的线形关系,相关系数r~2均大于0.99。 1.3三种聚醚类抗生素在磷酸盐缓冲液中最低检测限的测定 本研究根据所添加药物浓度可产生直径大于10mm的、明显的、清晰的抑菌圈为标准来确定最低检测限。结果表明:同一药物在不同菌种条件下,最低检测限各有不同,莫能菌素的最低检测限分布在1.0~2.0μg·mL~(-1)之间、盐霉素的最低检测限分布在0.25~2.0μg·mL~(-1)之间、马杜霉素的最低检测限分布在1.5~2.5μg·mL~(-1)之间。 1.4三种聚醚类抗生素微生物检测法敏感菌的筛选 本实验通过测定三种药物在四种不同菌种条件下的最低检测限来筛选出敏感菌。结果表明:莫能菌素采用金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌时敏感性最强、检测限最低,达到1.0μg·mL~(-1);盐霉素采用枯草芽孢杆菌时敏感性最强,最低检测限为0.25μg·mL~(-1);马杜霉素采用短小芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌时敏感性最强,最低检测限为1.5μg·mL~(-1)。 2鸡组织中三种聚醚类抗生素残留检测微生物学方法的建立 2.1鸡组织中三种聚醚类抗生素标准曲线的制备 本研究采用各空白组织提取液将各标准品稀释为六个不同浓度梯度,相邻浓度为2倍剂量关系,并采用敏感菌制备标准曲线。结果表明:各标准品于不同时间分别制备五组工作曲线,其斜率的变异系数均低于10%,表明其变异程度小,重复性好。对各标准品的五组工作曲线各浓度抑菌圈直径的矫正值求平均值,并以此绘制标准曲线,相关系数为r均大于0.99。 2.2鸡组织中三种聚醚类抗生素回收率的测定 本研究通过在各组织中添加不同药物浓度,使用敏感菌测定其回收率和精密度。结果表明:当药物添加水平增大的时候,其回收率也随之增大,莫能菌素的回收率为62.9%~87.7%,盐霉素的回收率为64.1%~87.8%,马杜霉素的回收率为61.8%~85.6%,变异系数分别为4.2%~14.2%、4.6%~14.2%和3.1%~14.8%。 2.3鸡组织中三种聚醚类抗生素最低检测限的测定 本研究选用敏感菌为工作菌进行三种药物在鸡组织中最低检测限的测定。实验结果表明:同种药物在不同组织中的最低检测限存在差异,其中在肌肉中的最低检测限要低于肝脏和肾脏。肌肉组织中三种抗生素的最低检测限分布在0.4~2μg·g~(-1);肝脏和肾脏组织中三种药物的最低检测限分布在0.6~2.5μg·g~(-1)。其中枯草芽孢杆菌的检测限更低,敏感度更高,为最适工作菌。 3三种聚醚类抗生素残留的检测 肉鸡分别连续3d内服莫能菌素(27mg·kg~(-1)·b~(-1)·W~(-1))、盐霉素(18mg·kg~(-1)·b~(-1)·W~(-1))和马杜霉素(1.5mg·kg~(-1)·b~(-1)·W~(-1)),本研究采用枯草芽孢杆菌检测停药后不同时间鸡肌肉、肝脏和肾脏组织中三种聚醚类抗生素的残留量。 结果表明:莫能菌素停药后在肌肉和肾脏组织中的药物残留浓度均低于检测限和MRL,在肝脏组织中停药18h后未检出、且停药后的残留量一直低于最高残留限量(MRL);盐霉素在肌肉组织中停药24h后残留量低于检测限和MRL,在肝脏组织中停药48h后未检出、18h后低于MRL,在肾脏组织中停药24h后未检出,且可得出盐霉素在肝脏组织中的代谢要比肌肉和肾脏组织中慢;马杜霉素则完全检测不出。 本研究表明,利用枯草芽孢杆菌为工作菌来检测聚醚类抗生素残留,其灵敏度高、可靠、快速、简便、易推广,适用于肉鸡组织中聚醚类抗生素残留的检测,为其在食品安全中的检测提供了科学的依据。……   
[关键词]:肉鸡;聚醚类抗生素;残留检测;微生物法;敏感菌
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:安徽农业大学2007年