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噬菌蛭弧菌的分离、鉴定、培养及其对细菌的抑制作用

王亚丽

   蛭弧菌为革兰氏阴性细菌,它能够攻击其它的革兰氏阴性细菌,穿透其周胞质,在细胞质中增殖,最后裂解细胞膜,释放寻找下一个目标。它能够在宿主菌双层琼脂平板形成噬斑。根据这一特性,从174份水样中分离得到21株菌株。经过筛选,获得一株在37℃正常生长的菌株,命名为BD5W。用噬菌蛭弧菌特异性引物经PCR鉴定为噬菌蛭弧菌。将该菌株16S rDNA部分序列与GenBank上蛭弧菌属其它序列进行同源性比较,结果分离菌株BD5W与B. Bacteriovorus HD 100和B. Bacteriovorus HD 127的同源性最高,达到99.4%;与Bacteriovorax sp. EEA分离株差异最大,同源性仅为10.5%。系统发育进化树分析,蛭弧菌属可以分为两个进化分支,分离菌株BD5W属于噬菌蛭弧菌分支。 噬菌蛭弧菌BD5W抗生素敏感性试验表明,分离株BD5W对多粘菌素B低度敏感,对麦迪霉素、四环素、洁霉素中度敏感。在不同温度下,BD5W的存活力不同。在30~39℃时,BD5W活菌数保持在108pfu/mL;在37℃和38℃下,23h即有噬斑形成;12℃生长缓慢,4℃以下不生长。液体培养基OD600值反映细菌的含量。通过测定液体培养基OD600(595nm)值,了解噬菌蛭弧菌的增殖情况。试验表明,BD5W能够在pH4~9的条件下生长,最适pH值为7。一系列培养试验表明,1/10YT和1/50YT培养基能够加速分离株BD5W对宿主菌(K88大肠杆菌)的裂解。在1/50YT培养基中培养140h后,OD600值可下降60.4%,在培养基中添加0.05M NaCl、0.05mM KCl、1mM MgCl2和1mM CaCl2,能增强BD5W噬菌能力,23h内OD600值下降了75.7%。试验中还发现分离株BD5W在1/100YT、1/200YT、1/500YT稀释培养基条件下,对热致死宿主菌的裂解能力高于活菌,然而在1/10 YT、1/50 YT稀释培养基条件下,结果却相反。 体外试验表明,噬菌蛭弧菌BD5W能够裂解K88大肠杆菌、K99大肠杆菌、鼠伤寒沙门氏菌、猪霍乱沙门氏菌、兔波氏杆菌等致病菌。噬菌蛭弧菌BD5W还能轻微裂解猪链球菌2型,但不能裂解多杀性巴氏杆菌,金黄色葡萄球菌。将分离株BD5W以107pfu/mL浓度给小鼠灌胃,试验组和对照组均健康,证明噬菌蛭弧菌对小鼠没有毒性作用。以107pfu/mL和105pfu/mL浓度的噬菌蛭弧菌BD5W治疗人工感染鼠伤寒沙门氏菌小鼠,小鼠存活率分别为90%和80%,未治疗组存活率仅为50%。表明噬菌蛭弧菌BD5W对该病有良好的治疗效果。 噬菌蛭弧菌BD5W能够裂解病原性致病细菌,可以作为一种微生态制剂,用于自然水体净化,以及预防和治疗动物体的细菌疾病。……   
[关键词]:噬菌蛭弧菌;分离;培养条件;抑菌;治疗
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:扬州大学2007年