手机知网 App
24小时专家级知识服务
打 开
手机知网|搜索

NS1蛋白42位氨基酸的改变对H5N1亚型禽流感病毒致病性影响的研究

刘威龙

   本研究选择1株分离于中国大陆的H5N1亚型高致病性禽流感毒株A/Duck/Guangxi/27/2003(H5N1)(简称DK27),对其NS基因进行定点突变使NS1蛋白42位丝基酸改变为甘氨酸,利用反向遗传技术拯救重组突变病毒(RDK27NS1S42G),并用该病毒进行小鼠的感染性试验,判定禽流感病毒NS1蛋白42位氨基酸改变是否影响DK27对小鼠的致病性。 我们首先对DK27的病毒基因组进行克隆测序,将所得8条RNA片段分别克隆PBD载体构建成转染质粒并共转染293T细胞,利用反向遗传技术成功拯救出重组亲本病毒RDK27。通过比较DK27和RDK27对小鼠的致病性试验结果发现:小鼠经106EID50病毒鼻腔接种感染后体重下降明显,且在感染后7天100%致死,两株病毒均表现为明显的高致病性,拯救的重组亲本病毒毒力没有发生变化。 为了验证H5N1亚型禽流感病毒NS1蛋白42位氨基酸改变对病毒致病性的影响,我们对NS基因进行定点突变使NS1蛋白42位丝基酸改变为甘氨酸,NS1突变基因经序列判定无误克隆PBD载体构建转染质粒,和其它7个RNA基因的转染质粒共转染293T细胞,利用反向遗传技术拯救出重组突变病毒RDK27NS1S42G。通过RDK27NS1S42G对小鼠的致病性试验结果发现:106EID50病毒经鼻腔接种感染小鼠后4、6天在肺脏中一直保持较高的含量,达107.03 EID50以上;脑中含量次之,但随时间的增加逐渐升高;肾脏﹑脾脏虽可分离到病毒,但含量均不高,小鼠经106EID5病毒鼻腔接种感染后体重下降明显,且在感染后7天100%致死。由此判定重组突变病毒均可通过呼吸系统侵入其他组织器官,并突破血脑屏障侵入大脑组织,最终引起小鼠死亡,对小鼠仍然表现为高致病力。与RDK27对小鼠的致病性比较发现,拯救的重组突变病毒对小鼠的致病性没有发生明显变化。由此判定:NS1蛋白42位氨基酸由丝氨酸(Ser)改变为甘氨酸(Gly)没有使DK27对小鼠的高致病性发生改变。……   
[关键词]:H5N1亚型禽流感病毒;反向遗传技术;NS1蛋白;致病性
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:新疆农业大学2007年