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农杆菌介导犁苞滨藜NHX基因转化苜蓿影响因素的研究

赵红娟

   本试验以子叶为外植体研究了2个苜蓿品种(新牧1号杂花苜蓿、新疆大叶紫花苜蓿)的组织培养程序,建立了苜蓿子叶植株再生体系。利用农杆菌介导法,将耐盐基因犁苞滨藜NHX转入苜蓿中,初步优化了农杆菌转化的方法。研究结果如下: (1)苜蓿子叶高效再生体系的建立 ①诱导培养基:MS+2,4-D 2mg/L +KT 0.5mg/L,新牧1号杂花苜蓿的出愈率为98.3%,新疆大叶紫花苜蓿的出愈率为97.5%;②分化培养基:MS+6-BA 0.5mg/L+NAA 0.1mg/L;新牧1号杂花苜蓿的绿芽分化率为38.4%,成苗率为19.3%;新疆大叶紫花苜蓿的绿芽分化率为43.3%,成苗率为22.5%;③生根培养基:1/2MS,新牧1号杂花苜蓿的生根率为45.7%,移栽成活率为78.3%,新疆大叶紫花苜蓿的生根率为62.6%,移栽成活率为74.2%。 (2)农杆菌介导犁苞滨藜NHX的苜蓿遗传转化体系 在愈伤组织诱导阶段加入卡那霉素对愈伤组织的再生有抑制作用,延迟15天进行抗性愈伤组织的筛选,可提高转化效率。本文以浸染后外植体的抗性愈伤组织率和抗性体胚形成率为指标建立了转化体系:子叶为转化受体的菌液浓度为OD600=0.4~0.5,浸染时间为10~15min,预培养3d,共培养4d,AS浓度为20~30mg/L;使用200mg/L的羧苄青霉素脱菌,在Kan 50mg/L下筛选得到具有卡那抗性的子叶愈伤组织系,在Kan 10mg/L下筛选出抗性芽;对所获得的抗性芽进行PCR检测,结果表明犁苞滨藜NHX基因整合到了苜蓿基因组中。……   
[关键词]:苜蓿;农杆菌;转基因;犁苞滨藜NHX基因
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:新疆农业大学2007年