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鸭肝炎病毒分离株的鉴定及弱毒株的选育

张阿娥

   鸭病毒性肝炎是由鸭肝炎病毒引起的一种急性接触传染性疾病,以急性发病、病程短和高死亡率为特征。该病在我国多个地区已多次爆发,且发病严重,流行区域广,损失巨大,严重威胁着我国的养鸭业。鸭肝炎可由三种不同类型的病毒引起,称为Ⅰ型,Ⅱ型和Ⅲ型鸭肝炎病毒。我国流行的主要是Ⅰ型鸭肝炎。但近几年来,不断有使用Ⅰ型鸭肝炎弱毒疫苗或高免卵黄抗体进行预防或治疗无效的鸭群爆发疑似鸭肝炎,怀疑为Ⅰ型鸭肝炎变异株或新型鸭肝炎。 本试验通过番鸭胚尿囊腔接种,对我省采集的2份死于疑似鸭病毒性肝炎的病鸭肝组织进行病原分离,获得2个病毒分离株VFY株和NFY株。分离株病毒经反复冻融,氯仿抽提,超速离心后,电镜负染均可见直径约20~40nm的病毒粒子。对VFY株病毒的理化特性研究表明:VFY株病毒对氯仿,胰酶有抵抗力,可耐受PH3.0的酸性环境。将2株分离株经鸭胚传至第5代,收集鸭胚尿囊液毒测定这些毒株的ELD50分别为10~(-6.52)/0.2ml,10~(-5.53)/0.2ml。用鸭肝炎Ⅰ型弱毒苗及其血清和2株分离株进行交叉中和试验,待检毒株VFY,NFY株和DHVI型的相关系数分别为35.73%和0,而NFY株与VFY株的相关系数为83.8%。结果表明:VFY株为Ⅰ型DHV变异株,NFY株为新型DHV,VFY株与NFY株为同一血清型。这两分离株对12~14日龄鸭胚的致死率为100%,人工感染1日龄雏番鸭(腿部肌肉注射)的致死率分别为60%和55.6%。死亡鸭呈角弓反张姿势,剖检主要可见肝脏肿大,有出血点或出血斑。 以Ⅰ型DHV变异株实验感染雏番鸭,对感染雏鸭的组织病理变化进行了观察,结果表明:感染雏番鸭肝、肾、脾、胰、脑的组织病理变化分别表现为出血性、坏死性肝炎,肾小管变性及异嗜性白细胞浸润,坏死性脾炎,胰脏的局灶性坏死及异嗜性粒细胞浸润和神经细胞的变性坏死。 建立了间接ELISA法以检测鸭肝炎病毒抗体滴度。病毒抗原经反复冻融离心后氯仿处理,再经Sephadex G-200分子筛层析提纯获得包被抗原,制备了阳性血清(中和效价1:99),阴性血清,酶标二抗。抗原包被量10ug/ml,酶标二抗稀释800倍,血清稀释25倍,临界值为0.342,结果以能产生阳性反应的血清最高稀释度为该血清的终点抗体滴度。 对Ⅰ型DHV变异株进行致弱选育研究。将Ⅰ型DHV变异株(VFY株)在SPF鸡胚上连续传70代(VFY—70)致弱后,经毒力返强试验表明VFY—70在1日龄雏番鸭体内连续传5代不出现毒力返强现象,是安全的。VFY—70稀释成100倍,200倍,500倍后分别免疫1日龄雏番鸭,对免疫的雏番鸭采血,间接ELISA法测定血清的效价,免疫雏鸭在第5天时抗体水平达到高峰,然后呈逐渐下降趋势。同时在免疫组雏番鸭5日龄时用Ⅰ型DHV、变异株强毒攻毒,观察雏鸭的死亡情况。由结果可知,VFY70株在100倍稀释时,保护率达100%,而500倍稀释时,保护率只为70%。结果表明,VFY70株经过鸡胚传代致弱后在毒力下降的同时免疫原性不受影响,可以作为疫苗的候选株。 本研究从病原学工作入手分析鸭肝炎病毒的致病性,在病原学工作研究的基础上,选育出较好的弱毒株,为疫苗的研制奠定坚实的基础,为有效地预防和控制鸭肝炎病毒引起地方性疾病提供一些技术手段和理论依据,并为鸭肝炎的流行病学调查和分类学工作提供素材。……   
[关键词]:中和试验;鸭肝炎变异株;致弱
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:福建农林大学2007年