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云南野生羊肚菌多糖的分离纯化与性质研究

杨虎

   羊肚菌[Morchella esculenta(L.)Pers.]是一种珍贵的食药用真菌,它营养丰富并含有多种功能成分,多糖就是其中的代表。本论文选用云南野生羊肚菌子实体作为材料,对其水溶性多糖的含量测定、提取工艺、分离纯化条件以及物理化学特性等方面进行了研究。获得如下研究结果: (1)预试实验发现:温度、时间、提取次数、料水比是影响热水法提取羊肚菌子实体多糖的主要因素。单因素实验表明,随提取温度的升高,多糖的得率逐渐提高;随提取时间的延长或料水比的降低,多糖得率先增加后降低;随提取次数的增加,多糖得率先急剧增加而后增加幅度变得不明显,当提取时间在2~3h、料水比在1:40时提取效果较好。对水提之后的残渣进一步用0.5mol/LNaOH常温浸提过夜,获得碱提水溶性多糖和碱提碱溶性多糖,但两种多糖得率非常低,分别为0.82%和0.54%。进一步通过正交实验对水提多糖的工艺进行优化后发现,料水比1:50,提取时间2h,提取次数为3次,温度95℃时多糖的得率最高。提取实验同时还发现羊肚菌浓缩提取液与冷的95%乙醇以1:4体积比混合时,多糖的沉淀效果最好。在以上条件下多糖得率可达4.96%。 (2)将热水提取获得的羊肚菌粗多糖用蒸馏水溶解后进行DEAE-52纤维素离子交换柱(40×500mm)层析。分别用蒸馏水、0.1mol/LNaOH溶液和0.2mol/LNaOH溶液阶段梯度洗脱,获得三种洗脱产物,MEP-1、MEP-2和MEP-3,它们的得率分别为12.40%、3.10%和5.94%。然后将羊肚菌多糖MEP-1用双蒸水溶解后,进行葡聚糖凝胶Sephadex G-100分子筛柱(16×1000mm)层析,上样量为20mg,用双蒸水洗脱,流速为2ml/5min,每管收集2ml,收集34~48管洗脱液,浓缩干燥后得到羊肚菌多糖MEP-1纯品,得率为1.58%。 (3)羊肚菌多糖MEP-1纯品经葡聚糖凝胶Sephadex G-100柱(16×1000mm)进行层析时所得到的洗脱曲线是单一对称的峰。将羊肚菌多糖MEP-1纯品在室温下进行凝胶渗透色谱分析(高效液相色谱系统,TSK-Gel G4000PWXL柱(7.8×300mm,4um)),以纯净水为流动相,流速为0.3 ml/min,柱压为1.5MP,温度25℃,示差检测,发现也只有单一的峰出现。可见,实验所得羊肚菌多糖MEP-1纯品为单一组分多糖。 (4)羊肚菌多糖MEP-1纯品呈现白色粉末,无气味,比旋光度[α]_D~(20)为+257.0(C=0.001,H_2O);水溶性好,属于中性多糖。羊肚菌多糖MEP-1纯品不含淀粉,是非淀粉类多糖,不含有单糖、糖醛酸、蛋白质,多酚类物质和核酸等,平均分子质量为43.652KD。纸层析分析发现羊肚菌多糖MEP-1纯品组成的单糖中可能含有葡萄糖、甘露糖、阿拉伯糖和半乳糖。红外色谱分析发现该多糖是以β-型糖苷键相连接的杂多糖,单糖组成中可能还含有木糖。……   
[关键词]:羊肚菌;多糖;分离;纯化;性质
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:西南大学2007年