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重庆市仔猪源大肠杆菌血清型、耐药性及基因分型的研究

孙晓锴

   致病性大肠杆菌是仔猪黄白痢的主要病原菌,近年来其耐药性在全球普遍呈迅速上升趋势。许多国家和地区通过对仔猪黄白痢的流行病学调查和仔猪源大肠杆菌的耐药性监测,积累了翔实的仔猪源大肠杆菌耐药性及其流行资料,并结合分子生物学方法研究仔猪源大肠杆菌耐药性的传播规律,这些研究对所在地区仔猪黄白痢的防治发挥了重要作用。重庆市关于仔猪源大肠杆菌的研究较少,尤其仔猪源大肠杆菌的耐药性及其传播仍缺乏详细的研究资料。为此,我们对重庆市不同地区仔猪源大肠杆菌进行了分离鉴定,对其血清学分型和耐药谱及基因分型进行了研究并比较了基因分型和表型分型的相关性。 1、仔猪源大肠杆菌的分离鉴定和血清学分型 从重庆市8个地区发生疑似仔猪黄白痢的猪场和散养户,无菌采集临诊表现典型的患病仔猪的肛拭粪样及死亡仔猪只的心血和肝脏等病料样本。对样本进行病原菌的分离培养,经过培养特性、形态特征、染色特性和生化试验及小白鼠感染试验,鉴定出173株致病性仔猪源大肠杆菌。 通过对这173株仔猪源致病性大肠杆菌的血清型鉴定,共鉴定出91株菌的血清型,占鉴定菌株的52.6%,82株未能定型,占鉴定菌株的47.4%。结果表明:重庆市仔猪源大肠杆菌流行的主要血清型为O_(101)(16.5%)、O_8(15.4%)、O_(20)(12.1%)、O_(64)(11.0%)、O_(45)(8.8%)、O_(149)(7.6%)共65株,占定型菌株的71.4%,占试验菌株的37.6%。除此之外,还有O_2,O_9,O_(54),O_(60),O_(89),O_(111),O_(119),O_(137),O_(138),O_(141),O_(147)等12种血清型。同一地区存在多种血清型,大多数地区有本地的优势血清型。不同地区优势血清型有的相同,有的不同。 2、仔猪源大肠杆菌的耐药谱 采用纸片扩散方法(即Kirby-Bauer的菌液涂布法)对173株仔猪源致病性大肠杆菌进行26种抗菌药物的体外药敏试验。结果表明:173株致病性大肠杆菌有132种耐药谱,对多类药有交叉耐药。抑菌作用最强的是头孢拉定,敏感菌株有150株;其次为先锋必,敏感菌株有134株;其它依次为先锋V、丁胺卡那、妥布霉素、头孢氨苄、新霉素、庆大霉素、链霉素、卡那霉素、氟嗪酸、氟哌酸、环丙沙星、痢特灵、氯霉素、阿莫西林、多粘菌素B;受检菌株存在广泛的耐药性,以多重耐药性为主,最少的是9耐的分离菌株,最高的可达25耐,其中主要有10耐(28.8%),22耐(12.7%),19耐(11.6%)、20耐(11.6%)、21耐(11.0%)、15耐(8.1%),13耐(6.4%)、18耐(5.8%),12耐(5.2%),17耐(4.6%),14耐(3.5%),23耐(3.5%)、24耐(1.7%),25耐(1.7%),9耐(1.7%)共16种情况。 3、仔猪源大肠杆菌基因分型及其与表型的相关性 采用脉冲场凝胶电泳(PFGE)对仔猪源大肠杆菌进行研究,并将其结果与表型(血清型、耐药谱)结果进行比较。结果表明:利用脉冲场凝胶电泳对已鉴定血清型的91株大肠杆菌进行基因分型,能够分型的68株菌可分为A、B、C、D共4型,分散于重庆市各个地区,其中A型为流行菌株,共有60株,分为3个亚型,其中A1型27株,A2亚型10株,A3亚型23株。基因分型结果与血清学分型和耐药谱对比,试验表明它们之间无对应关系。……   
[关键词]:仔猪;大肠杆菌;血清型;耐药谱;基因分型
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:西南大学2007年