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杭州市正常水禽中主要血凝性病毒的检测

吴玲

   采集临床正常鸭子泄殖腔棉拭子经0.22微米过滤除菌,并用先锋Ⅵ作用后接种10日龄的鸡胚,盲传3代。对收获的尿囊液进行HA试验,将具有血凝性的尿囊液与ND标准阳性血清、禽流感H_9和H_5标准阳性血清、鸡减蛋综合症标准阳性血清进行血凝抑制试验鉴定,结果分离到了5株新城疫病毒和1株H_5禽流感病毒。 其中分离到NDV的1号分离株和2号分离株的第2代、第3代鸡胚全身出血,以头部、足趾、翅膀出血尤为明显。H_5亚型禽流感病毒致死胚也出现严重的全身出血症状,鸡胚死亡时间在24~60小时左右。 本研究根据AIV保守片段NP片段进行引物设计,以确定A型流感病毒的存在。在此基础上,选择禽流感病毒亚型决定片段HA基因为目的基因,设计8节段基因共同引物及HA基因特异性引物,以进一步鉴定其亚型及分析其致病性两次RT-PCR扩增及HA全基因测序分析,提高了检测的敏感性,且避开了由于HA基因在裂解位点的突变而导致的PCR的失败。 对分离病毒的尿囊液进行AIV的RT-PCR检测,结果均扩增出特异性的目的条带,对RT-PCR产物的克隆测序与BLAST比较结果进一步验证了该检测系统的可靠性。将该AIV毒株克隆测序所测得的序列用DNA Star软件分析其编码的氨基酸序列。 将序列提交NCBI进行BlastP比对发现与很多已经发表过的鸭源流感病毒株具有高度的同源性,其中最高的可达到99%。……   
[关键词]:禽流感;新城疫;分离;鉴定;RT-PCR
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:浙江大学2006年