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新城疫病毒长春株结构基因的克隆、表达及全基因组克隆研究

李旭

   采用RT-PCR方法克隆了NDV CC株L基因、基因组末端序列及各基因间隔区序列,与其它10株NDV毒株进行序列比较分析,结果表明,与B1、LaSota、Clone30等经典的弱毒株的同源性较高,与ZJ1、Mukteswar等强毒株的同源性较低,序列中某些区域氨基酸的变化表明强、弱毒株差异显著。在本室已完成其它基因序列测定的基础上,完成了该毒株的全基因序列拼接,为建立该毒株的感染性克隆奠定了基础。 构建了包含新城疫病毒NP、P、L基因的真核表达质粒pCI-NP、pCI-P、pCI-L,分别转染CEF,运用间接免疫荧光法对质粒pCI-NP、pCI-P的表达效果进行检测,运用RT-PCR方法对质粒pCI-L的表达效果进行检测,结果表明所构建质粒在CEF中均获得成功表达,成功构建了病毒感染性克隆所需的辅助质粒。 完成了全长基因组cDNA的分段克隆,并对各cDNA片段进行拼接,完成了包含基因组两末端在内的约8000bp片段的连接,并将其克隆到载体pKS(-)上,构建了质粒pKS(-)-ND15。为后续构建基因组全长cDNA,进而构建感染性克隆打下基础。……   
[关键词]:新城疫病毒;结构基因;基因组;克隆;序列分析;构建;真核表达
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:吉林大学2007年