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云南省主要推广核桃品种的分子标记鉴别及遗传分析

杨恩

  漾濞核桃(Juglans sigillata Dode)为云南省重要的经济林树种之一,随着云南省核桃产业的发展,对于核桃遗传背景方面知识的需求和应用科学手段鉴别核桃品种,维持核桃市场秩序的需求日益增加。本研究利用RAPD(Random Amplified Polymorphic DNAs,即随机扩增多态性DNA)分子标记和ISSR(Inter-simple Sequence Repeats简单序列重复间区)分子标记技术对云南省11个漾濞核桃品种进行分子鉴别和遗传分析。为品种鉴别提供分子水平上的参考,为核桃的育种提供理论依据。参试的11个核桃品种包括4个云南乡土核桃品种:漾濞泡核桃、大姚三台核桃、夹绵核桃和铁核桃和7个优良杂交品种:云新高原核桃(云新7914号)、云新云林核桃(包括:云新7926号、云新8034号、云新8064号)、云新90301号、云新90303号和云新90306号。研究的内容及结果如下:1.DNA提取:以漾濞泡核桃不同生长时期的叶片为材料,采取了高盐低PH法和CTAB沉淀法提取基因组DNA,并通过琼脂糖凝胶电泳、紫外分光光度计和RAPD扩增3种方法对所提取的DNA样品进行检测。比较所得DNA的产量、质量,认为不同发育时期叶片得DNA提取效果不同,其中以冬芽和新叶效果较好,老叶最差;两种提取方法得到得的DNA产量和质量有所不同,高盐低PH法提取的DNA纯度高,但是产量较低,而CTAB法则相反,产量高,纯度低。2.建立稳定的反应体系以漾濞核桃中的大姚三台核桃为实验材料,通过对影响RAPD扩增结果的主要因子:Tag酶、Mg~(+2)、引物、模板DNA、dNTPs等不同的浓度组合和扩增程序的试验研究,确定了漾濞核桃的最适RAPD反应体系和扩增程序。即在25uL反应体系中包括0.75u.L~(-1)Taq DNA聚合酶,3.0mmol.L~(-1)Mg~(+2),0.3mmol.L~(-1)引物,含1.6mg.L~(-1)模板,2.5ul 10×Buffer,dNTPs各0.2mmol.L~(-1)。扩增程序为:94℃预变性300s,94℃变性40s,36℃退火60s,72℃链延伸120s,45次循环后,72℃延伸600s。ISSR反应体系和扩增程序为总的20uL反应体系中包含:模板DNA 1.0uL(50ng),10×Buffer2.0uL,10pmol.uL~(-1)引物1.5uL,2.5mM dNTPs 1.6uL,25mM Mg~(+2)1.8uL,5U TaqDNA聚合酶0.12uL,ddH_2O 11.98uL;热循环体系为:95℃预变性600s,然后94℃变性30s,50℃退火60s,72℃链延伸120s,共35个循环最后72℃延伸420s。3.引物筛选通过对RAPD和ISSR引物的筛选,分别筛选出8个能够扩增出清晰、稳定并能扩增出多态性位点的RAPD引物和ISSR引物。RAPD引物为:SBS A07、SBS A08、SBS B06、SBS E11、SBS F10、SBS S03、SBS S06和SBS S10;ISSR引物及其退火温……   
[关键词]:漾濞核桃;分子标记;RAPD;ISSR;品种鉴别;遗传分析
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:西南林学院2006年