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南美白对虾N-乙酰-β-D氨基葡萄糖苷酶的活力调控及动力学研究

龚敏

   N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶( N-Acetyl-β-D-glucosaminidase,简称NAGase,EC. 3.2.1.52 )在南美白对虾(Penaeus vannamei)的蜕壳发育和营养代谢中起重要作用,且具有多种应用价值。 本文以南美白对虾内脏为提酶材料,获得电泳单一纯的NAGase酶制剂,本文以此酶制剂为对象展开研究。 常见金属离子Li+、Na+、K+对酶活力没有影响,Co2+、Cd2+、Ba2+、Zn2+、Al3+、Pb2+、Cu2+、Fe3+、Ag+、Hg2+,有不同程度的抑制。Ag+离子对酶表现为反竞争性抑制(KIS为2.39 mmol/L),Zn2+离子对酶表现为非竞争性抑制(KI为11.95 mmol/L),并研究了Zn2+离子对酶的抑制动力学。 Hg2+离子对酶为不可逆抑制作用,IC50为0.16 mmol/L。通过抑制动力学研究,可求出微观速率常数k+0和k + 0。酶经Hg2+离子作用后的荧光强度下降,酶在276 nm处的紫外特征吸收峰逐渐下降至几乎消失。 丙酮在pH4.8~pH5.0范围内表现为抑制作用,pH5.2~pH8.0范围内为先激活后抑制,其中在pH6.2和pH6.8处达到激活的最大值。酶经丙酮作用后的荧光发射强度迅速下降,荧光激发峰在强度下降的同时还伴随着最大激发波长的红移(由280 nm红移到290 nm)。 DMF和DMSO使酶失活的IC50分别为1.35 mol/L和1.20 mol/L。二者对酶的失活机理都为可逆,失活类型表现为混合型类型。研究了DMF和DMSO对酶的失活作用动力学,测定微观速度常数。游离酶的失活速度常数明显的大于ES结合酶的失活速度常数,说明底物对酶的失活有保护作用。酶经DMSO作用后的荧光强度随着DMSO浓度增大逐渐上升,但未出现明显红移。 以荧光发射光谱研究酶经不同浓度脲变性后的分子构象变化。比较酶经脲变性后的活力与构象变化的关系,表明酶在脲溶液中的失活先于其去折叠的过程,这种活力丧失快于酶分子整体构象变化的现象表明酶活性中心处于对变性剂较为敏感的区域。……   
[关键词]:南美白对虾N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶;酶活调控;动力学
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:厦门大学2006年