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HCMV临床病毒株的分离及其特定基因结构分析和表达研究

王波

  目的:1.分离广州地区围产新生儿感染的人巨细胞病毒(HumanCytomegalovirus,HCMV)临床病毒株;2.研究这些低传代HCMV临床病毒株基因组中的特有基因UL136~UL148的结构,分析其结构多态性与HCMV先天性感染致病的关系;3.研究HCMV临床毒株特有基因的表达情况,探讨这些基因编码产物的功能,揭示它们在先天性HCMV感染的致病机制中可能的作用。试图通过这些研究为临床低传代HCMV临床致病机制的研究奠定基础。方法:1.从广州地区先天性感染HCMV的新生儿尿液中分离野生型HCMV病毒,获取病毒DNA和RNA;2.根据GenBank公布的HCMV低传代毒株Toledo的UL136-UL148等13个基因全序列及有关文献,应用PCR技术扩增这些特有基因片段;3.应用基因克隆技术构建这些特有基因的重组质粒;4.对重组体进行测序;5.应用生物信息学方法分析这些基因结构、及其编码蛋白质的多态性;6.应用RT-PCR技术检测上述基因mRNA的表达情况;7.并分析其编码产物的基本性质和特征。结果:1.成功分离获得4株HCMV临床低传代病毒株:HCMV D3、D2、D52、C30;2.以HCMV D3临床毒株为研究主体,应用PCR技术成功扩增出UL136~UL148特有区域的全部13个基因,同时扩增其他临床毒株的相应基因,获得上述毒株的13个特有基因的总共32个全基因序列;3.克隆测序,序列呈报GenBank,收录序列号为:DQ180354~DQ180391;4.对临床毒株的这些基因及其编码的蛋白质进行同源性比较分析,发现大部分基因较为保守,具有相对稳定的序列,同时又具有较为丰富的多态性;5.从C30野生毒株中能检测到UL137、UL142、UL144、UL145和UL148等5个基因存在mRNA水平的表达。结论:1.广州地区围产新生儿感染HCMV的临床毒株基因组中,存在着实验病毒株所缺失的UL136~UL148等13个独特基因结构,并且具有较为丰富的多态性。2.本研究初步证实了其中UL137、UL142、UL144、UL145、UL148等5……   
[关键词]:人巨细胞病毒;临床病毒株;UL137;UL142;UL144;UL145;UL148;表达
[文献类型]:博士论文
[文献出处]:暨南大学2006年