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虫草多糖对单侧输尿管梗阻小鼠肾小管上皮间充质转化的影响及机制探讨

吴冀宁

   目的:肾间质纤维化是各种肾脏疾病进展到终末期肾病的共同途径和主要病理基础, TIF程度与肾脏疾病预后密切相关,TIF程度越重,肾脏疾病预后越差。近年发现在慢性肾脏疾病的进展中,肾小管上皮细胞不仅是被动的受害者,而且是主动的参与者,越来越多研究提示EMT是TIF形成的重要环节。抑制甚至逆转EMT可能会给TIF的治疗带来革命性的突破。虫草多糖是传统中药冬虫夏草的主要成分,可以调节免疫功能、降低血糖、抗肿瘤、保护肾脏。多年临床经验表明,慢性肾脏病患者长期服用冬虫夏草可降低蛋白尿、延缓慢性肾病进展。但是其具体作用机制至今尚未完全明确。近年研究显示,虫草对组织纤维化尤其对肝脏纤维化有明显的抑制作用。目前,关于虫草多糖对肾脏纤维化的研究少见报道,本研究主要目的是观察虫草多糖对UUO小鼠肾小管上皮间充质转化的影响,并探讨其可能的相关机制。 方法:选用雄性CD-1小鼠,我们采用经典的单侧输尿管梗阻模型。实验分组:1)对照组(N=8);2)手术组(N=10);3)虫草多糖治疗组(N=10)。给予小鼠标准饲料自由进食及饮水,每天记录体重。手术组和治疗组小鼠均打开腹腔,分离左侧输尿管,双线结扎后离断。对照组小鼠只打开腹腔但不结扎输尿管。治疗组在术前2天开始给予虫草多糖溶于蒸馏水,160 mg/kg灌胃。术后7天处死小鼠。小鼠取腹腔动脉血,取左侧部分肾组织于10%中性福尔马林固定,石蜡包埋;其余肾组织于液氮冷冻,-80℃保存。测定小鼠的血肌酐值。光镜下观察各组小鼠肾脏间质纤维化程度。免疫组化观察各组肾脏α-SMA、E-cadherin、CTGF、ILK、的表达分布变化。用Western blot方法定量检测各组肾脏ILK和CTGF蛋白表达量变化。用real time PCR技术观察各组肾脏α-SMA、E-cadherin、CTGF、ILK mRNA水平的变化。 结果:手术7天后,各组小鼠血肌酐无显著差异,但手术组小鼠患侧肾脏比对侧体积增大,颜色苍白,提示UUO模型建立成功。研究发现,手术组小鼠间质纤维化程度较对照组加重(19.39±1.52% vs.2.00±0.34%, P<0.01),而虫草多糖可以显著减轻肾间质纤维化(11.25±1.07% vs.19.39±1.52%, P<0.01)。免疫组化结果显示,手术组小鼠肾小管上皮E-cadherin蛋白表达较对照组显著减少,而肾小管及间质区α-SMA蛋白的表达比对照组显著增加(P均<0.01)。治疗组小鼠肾小管上皮E-cadherin表达比手术组明显增多,但仍明显低于对照组(P均<0.01)。治疗组α-SMA蛋白的表达较手术组显著降低,但高于对照组(P均<0.01)。Real time PCR的结果显示,手术组小鼠α-SMA mRNA的表达较对照组显著增多,治疗组小鼠α-SMA mRNA的表达比手术组明显减少(P均<0.01)。手术组小鼠E-cadherin mRNA的表达较对照组显著降低,而治疗组E-cadherin mRNA的表达较手术组明显增多(P均<0.01)。研究中我们发现,对照组小鼠肾小管仅有少量CTGF、ILK表达分布,而手术组小鼠肾小管CTGF及ILK蛋白及mRNA的表达显著升高。虫草多糖治疗后,小鼠肾小管CTGF、ILK蛋白及mRNA的表达都明显低于手术组(P均<0.01)。 结论: 1、UUO小鼠早期肾小管上皮细胞E-cadherin表达减少,α-SMA表达增多,提示肾小管上皮细胞发生了EMT。 2、UUO小鼠CTGF、ILK的表达增多,可能介导了EMT的形成。 3、虫草多糖可显著抑制CTGF、ILK的表达,并抑制E-cadherin的丢失和α-SMA的表达,提示其对……   
[关键词]:肾间质纤维化;虫草多糖;结缔组织生长因子;整合素连接激酶;UUO小鼠;上皮-间充质转分化
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:东南大学2006年