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植物内生菌生物活性物质的研究

阮丽军

  植物内生菌作为一个多样性十分丰富的微生物类群,代谢产物非常丰富,包括杀虫、抗菌、抗肿瘤等活性物质,是人们寻找新型抗菌、抗肿瘤药物的重要资源。本论文利用上海来益生物药物研发中心的植物内生菌资源,通过各种模型的筛选,在获得活性菌株的基础上,对其中的三株进行了菌种鉴定,并对它们的次级代谢产物进行分离、纯化及活性研究。主要研究工作包括以下几个方面:利用770株植物内生菌进行了发酵液的样品制各,获得了7040份样品,经14种不同模型筛选,共获得16份活性样品。对具有HIV-1整合酶抑制剂活性的菌株HCCB00167、HCCB00189及具有抗肿瘤活性的菌株HCCB00189、HCCB01546进行进一步的研究。根据菌株的形态、培养特征及18S rDNA序列分析结果,活性菌株HCCB00167、HCCB00189及HCCB01546进行菌种鉴定,分别鉴定为蚀丝霉属、枝顶孢霉属、白壳菌属。对活性菌株HCCB00167、HCCB00189及HCCB01546进行了代谢产物的研究。应用多种分离方法,从菌株HCCB00167的发酵液中分离出七个化合物:HCCB00167-1~7。鉴定了其中6个化合物,分别为:5,8-过氧麦角甾-6,22-二烯-3-醇;麦角甾醇;3,22,24-三羟基-齐果墩烷-12-烯;4’-羟基,7-甲氧基异黄酮;4’,5-二羟基,7-甲氧基异黄酮;4-丁基-2-吡啶羧酸。其中化合物HCCB00167-7为首次直接从微生物来源的代谢产物中获得。从菌株HCCB00189的发酵液中分离出五个化合物:HCCB00189-1~5。分别鉴定为:4-甲基苯甲酸羧甲基酯;4-甲氧甲酰基苯甲酸;4-羟甲基苯甲酸;4’,7-二羟基异黄酮,即大豆甙元;4’,5,7-三羟基异黄酮,即染料木素。其中HCCB00189-1、2、3三个化合物为首次从微生物来源的代谢产物中分离得到。并对五个化合物进行抗肿瘤活性测试,结果显示:化合物HCCB00189-4与HCCB00189-5对A549和LoVo细胞有较明显的抗肿瘤活性。从菌株HCCB01546的发酵液中分离出六个化合物:HCCB01546-A-F。运用现代波谱技术,鉴定了其中5个化合物,分别为:麦角甾醇、过氧化麦角甾醇、环氧化细胞松驰素H、细胞松驰素N和环氧化细胞松驰素J。其中HCCB01546-C、D、E三个化合物为首次从白壳菌属中分离得到的细胞松驰素类物质。通过体外抗肿瘤活性测试发现化合物HCCB01546-B、HCCB01546-C及HCCB01546-E对肿瘤细胞A549和(或)LoVo细胞有较明显的抑制作用。MTT法考察了化合物HCCB01546-C对多种肿瘤细胞的抑制作用,发现其抗肿瘤活性呈明显的剂量效应和时间效应关系,而肝癌Hep-G2细胞对化合物HCCB01546-C有明显耐受。体内移植瘤实验结果表明,化合物HCCB01546-C对裸鼠移植瘤的生长有明显的抑制作用,且均有一定的量效关系。……   
[关键词]:植物内生菌;筛选;分离纯化;次级代谢产物;HIV-1整合酶抑制剂;抗肿瘤活性;细胞凋亡;分子机制
[文献类型]:博士论文
[文献出处]:上海医药工业研究院2006年