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副猪嗜血杆菌灭活疫苗的研制

王艳

  副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis,HPs)是猪Glasser’s病的病原体,猪上呼吸道的一种共栖菌,它可在特定条件下侵入机体而引起以纤维素性多发性浆膜炎、关节炎和脑膜炎为特征的全身性疾病。HPs隶属于巴氏德杆菌科(Pastteurellaceae Poh1,1981)嗜血杆菌属(Haemophilus winslow et al.,1917)。HPs是一种非溶血性、非运动性、NAD依赖型、革兰氏阴性细小杆菌。目前,我国很多省市患病猪群中均可分离获得副猪嗜血杆菌,该菌已成为保育猪死亡的主要原因之一,给我国养猪业带来了巨大的经济损失,但尚无有效的预防和控制措施。本文从副猪嗜血杆菌分离株ZJ0402生物学特性的研究及菌株毒力的测定、副猪嗜血杆菌间接ELISA抗体检测方法的建立及副猪嗜血杆菌灭活疫苗仔猪免疫保护效力三个方面进行了系统的研究。结果如下:1.副猪嗜血杆菌分离株ZJ0402生物学特性研究:本研究对本实验室分离的HPs分离株ZJ0402的培养特性、生化特性、对化学消毒剂的敏感性、灭活方法及保存方法进行了研究。结果为:(1) 该分离菌株培养过程中最适辅酶补充量为0.002%、最适培养时间为10h;(2) 1~9代菌株的生化特性为发酵木糖、山梨醇,尿素、鸟氨酸脱羧酶试验结果为阳性;(3) 1:10000稀释的苯扎溴铵和1:3000稀释的过氧乙酸可有效杀灭该菌,而1:40稀释的复方次氯酸钠和1:800稀释的蓝光消毒剂灭菌效果较差;(4) 通过菌体灭活试验确定0.2%甲醛作为最佳的灭活剂浓度,最佳灭活条件为37℃灭活14h;(5) 保存方法:HPs于20%甘油中,置—20℃可保存2个月,置-50℃可保存4个月,冻干后置于-50℃冰箱至少可保存一年,为研制副猪嗜血杆菌灭活疫苗奠定了重要基础。2.副猪嗜血杆菌分离株ZJ0402毒力的测定:以不同剂量的副猪嗜血杆菌分离株通过鼻腔接种的方式感染断奶仔猪,攻毒剂量分别为1.03×10~9CFU/头、1.03×10~7CFU/头和1.03×10~5CFU/头,攻毒后观察10天,每天观察临床症状,剖检濒死及病症严重猪、分离细菌并观察病理变化,计算日增重确定各攻毒剂量对仔猪生长状况的影响。结果,通过鼻腔接种1.03×10~9CFU/头和1.03×10~7CFU/头HPs都可以引起仔猪格氏病(Glasser′s disease),其中攻毒剂量为1.03×10~9CFU/头可引起仔猪Glasser……   
[关键词]:副猪嗜血杆菌;间接ELISA;灭活疫苗;保护效力
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:南京农业大学2006年