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肉鸡热应激损伤与热休克蛋白70表达的研究

孙培明

  热休克蛋白(heat shock proteins,HSPs)是在机体受到应激原的刺激后产生的几族蛋白质,具有高度保守性,对维持细胞生存和内环境的稳定起重要作用。HSPs具有多种生物学功能,如分子伴侣作用、协同免疫作用、抗细胞凋亡作用和抗应激作用等,其中分子伴侣作用是其最基本的生物学功能。HSPs作为一类重要的非特异性细胞保护蛋白,在应激耐受和应激保护中发挥重要作用。通常人们根据HSPs的分子量大小,将其分成6个家族:小分子量HSPs家族、HSP40家族、HSP60家族、HSP70家族、HSP90家族和大分子HSPs家族。其中HSP70家族是最保守和最重要的一族,在大多数生物中含量最多,在细胞应激后生成最显著,家族成员也最多。本文主要从肉鸡的热应激损伤、HSP70 mRNA水平的变化、HSP70蛋白水平的改变等方面探讨肉鸡热应激损伤与热休克蛋白70表达的相关性。将120只30日龄的肉鸡随机分为对照组、热应激6h组、热应激12h组、热应激18h组、热应激24h组和热应激48h组共6组。经过30天的适应性饲养后,除对照组不进行热应激处理,温度控制在25±1℃外,热应激组的环境温度在20min内从室温突然升至40±1℃。按照试验设定的时间,分别剖杀对照组鸡和热应激处理鸡,取全血制备血清,同时取肉鸡心脏、肝脏、肺脏、肾脏、脾脏、胸腺和法氏囊等组织,一部分固定在10%中性福尔马林溶液中,一部分速冻于液氮并置-70℃冰柜中保存。通过测定血清中肌酸激酶(CK)和谷丙转氨酶(GPT)活性,观察热应激对肉鸡的组织病理损伤(主要是心脏和肝脏)程度。试验结果显示,热应激过程中CK和GPT的含量呈现波动性变化,热应激12h时CK和GPT呈现较高水平,提示此阶段心肌和肝脏发生严重损伤;热应激24h时CK和GPT呈现较低水平,提示此时热应激对心肌和肝细胞损伤有所缓和。进一步通过受试鸡心脏、肝脏、肺脏、肾脏、脾脏、胸腺和法氏囊等组织的组织病理结果发现,心脏主要表现为心肌纤维断裂,肝脏和肾脏主要表现为细胞坏死,肺脏主要表现为出血和坏死,脾脏、胸腺和法氏囊主要表现为淋巴细胞坏死。通过RNA探针的原位杂交试验研究诱导型热休克蛋白70(HSP70)mRNA在肉鸡心脏、肝脏、肺脏、肾脏、脾脏、胸腺和法氏囊等组织中的分布情况。结果显示,热应激时HSP70 mRNA主要分布在肝脏和肺脏中,尤其在血管壁或血管周围最为明显;心……   
[关键词]:肉鸡;热应激损伤;热休克蛋白70;荧光定量PCR;单克隆抗体
[文献类型]:博士论文
[文献出处]:南京农业大学2006年