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食品中残留醋酸甲羟孕酮酶免疫检测方法研究

郭金花

   本论文旨在开发快速检测醋酸甲羟孕酮(MPA)的ELISA试剂盒。先将肟化后的MPA分别与牛血清白蛋白(bovine serum albumin,BSA)和卵清白蛋白(ovalbumin,OVA)通过混合酸酐法交联,制备成免疫抗原MPA-BSA和包被抗原MPA-OVA。再将得到的免疫原MPA-BSA按免疫程序免疫新西兰白兔4只,5次免疫后发现其中一只兔子产生的抗血清效价达到6400。然后以此抗血清为基础设计了间接竞争ELISA方法,并优化稀释缓冲液、pH、竞争时间等实验条件确定最终的ELISA检测系统。 本论文研制试剂盒的IC50为4.95ng/mL,线性范围为0~100ng/mL。通过灵敏度、精密度、准确度和特异性等指标来评估此检测方法,最低检测限范围在0.1~0.3ng/mL之间,除对甲地孕酮的交叉反应率为4.2%外,对其他结构类似物的交叉反应率≤0.1%,并且标准和样品的重复性的批内变异系数小于15%,批间变异系数小于20%。本论文以1ng/g和5ng/g两个浓度分别添加到样品中测定回收率,尿样和牛奶需经过离心、稀释基质方法进行测定,肌肉组织则需要乙酸乙酯先抽提再皂化去脂的方法进行测定,所得回收率范围在40~110%,变异系数小于15%。 最后将本试剂盒与荷兰EURO-DIAGNOSTICA公司的试剂盒进行比较,回收率、变异系数等结果基本一致,与GC-MS方法比较,检测结果较接近。本论文研制的ELISA试剂盒的各项参数都达到了国外试剂盒的指标和要求,可用于实际检测。……   
[关键词]:兽药残留;醋酸甲羟孕酮;半抗原;混合酸酐法;ELISA
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:江南大学2006年