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鸡毒霉形体的分离鉴定及其16S/23S rRNA基因间隔区、TM-1基因序列差异分析

郭锐

  鸡毒霉形体(Mycoplasma gallisepticum,MG)是鸡的慢性呼吸道病(Chronic respiratory disease,CRD)的病原菌,其特征为呼吸啰音、咳嗽、流浆液性鼻液和气囊炎。通常与传染性支气管炎病毒,新城疫病毒和大肠杆菌等病原协同感染,导致呼吸道症状加剧,使死亡率增高。MG感染在国内禽群中相当普遍,感染后鸡死亡率一般很低,主要表现为产蛋率、孵化率降低,出栏期延长和饲料利用率降低;对该病的预防和控制程序也额外增加了成本,同时造成禽产品中药物残留,给养禽业造成严重的经济损失。本研究通过对湖北,河南两地38个鸡场(舍)的162只患呼吸道疾病的鸡进行霉形体的分离。通过菌落观察及细菌L型回复试验,结果从10个鸡场(舍)的23只鸡中分离纯化了77个霉形体分离物。对所有霉形体分离物进行了菌落形态观察、菌落红细胞吸附试验、生理生化及血清学鉴定,结果59个分离物被鉴定为鸡毒霉形体。被鉴定为鸡毒霉形体的分离物,在液体培养基中能发酵葡萄糖,使培养基颜色变黄,在固体培养基表面所形成的菌落呈典型的油煎蛋状外观,大小约50-250μm之间,菌落能吸附0.5%的鸡红细胞,用抗MG S6株血清以微量法对77个分离菌株进行了鉴定,结果有59个被鉴定为鸡毒霉形体,代谢抑制价在1:80-1:1280之间,且与鸡红细胞菌落吸附试验阳性结果一致。通过对MG分离物16S/23S rRNA基因间隔区进行扩增分析,MG扩增片段的大小约890bp,与文献报道一致。利用限制性内切酶Rsa I对该片段进行限制性片段长度多态性分析,所有MG分离物显示两种不同的酶切图谱,有36个菌株为790/100型,即片段上有一个Rsa I位点,被酶切为790bp和100bo两个片段;有23个菌株为550/240/100型,片段上有两个酶切位点,被切成3个片段,说明鸡毒霉形体虽然血清学上没有差异,但在基因型上不同的菌株之间可能存在差异。从8个分离到鸡毒霉形体的鸡场中选各取一个MG分离株(JX44、HC14、ML21、WS12、XA62、XZA25、XZC21、YMA22),对上述菌株的TM-1基因进行扩增并测序。TM-1基因测序结果表现出高度保守性,核苷酸序列同源性在97.1%-99.6%之间,氨基酸同源性在94.6%-99.2%之间。本研究从湖北省近40个发病鸡群分离鉴定了众多MG野外分离株,对分离株进行了系统鉴定和分子进化研究,为今后进一步开展MG不同分离株的病原性探索、自然弱毒株的筛选、抗原及基因型差异鉴定、基因工程疫苗研制以及鸡毒霉形体感染的综合性防治研究奠定了基础。……   
[关键词]:鸡毒霉形体;分离鉴定;16S/23S rRNA基因间隔区;TM-1;序列分析
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:华中农业大学2006年