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氨基酸柱前衍生化HPLC方法发展及应用

唐涛

  氨基酸是蛋白质的基本单元,是人体完成生理功能的必须物质。发展普适性广、灵敏度高、分离效能好、重复性优良的HPLC分析方法,一直是分析化学领域探索的重要课题。分别以邻苯二甲醛(OPA)及2,4-二硝基氟苯(DNFB)为衍生化试剂,发展氨基酸的柱前衍生HPLC分析方法。考察了柱温、衍生试剂用量、反应时间及流动相pH值等因素对分析结果的影响。结果表明,柱温对分离选择性的影响很大,改变柱温甚至可能影响到氨基酸DNFB衍生产物(DNP-AA)的出峰顺序;衍生反应时间对OPA衍生氨基酸的定量分析影响显著。为弥补单一色谱填料分离选择性的不足,通过对DNP-AA在6种不同C18填料上分离行为的考察,发展了“串联”和“混装”的色谱柱模式。采用C18-B与C18-SA串联的操作模式,可以使DNP-AA的分离选择性得到较大改善。而以C18-B和C18-SA填料混合装填色谱柱进行DNP-AA的分离,所得峰形、柱效等更佳。基于发展的新方法,测定了啤酒、冬虫夏草等实际样品中的氨基酸,并对样品的预处理方法加以改进。结果表明,方法具有很好的普适性。……   
[关键词]:氨基酸;柱前衍生化;邻苯二甲醛;2;4-二硝基氟苯;新型HPLC柱
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:南京理工大学2006年