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蝴蝶兰组培外植体褐化影响因素的研究

赵伶俐

   蝴蝶兰(Phalaenopsis spp.)是一种极富观赏价值的名贵花卉,被誉为“洋兰皇后”,组织培养为其主要的繁殖方式。褐化现象在其组培快繁过程中普遍存在,严重影响外植体分化,是制约蝴蝶兰工厂化生产的难题。本研究以蝴蝶兰无菌苗为材料,观察其褐化前后的细胞结构;定性定量分析褐化前后外植体内的酚酸;测定不同处理外植体内PPO活性和总酚含量,以期找到有效降低褐化的方法。主要研究结果如下: 1.光学显微镜观察表明,褐变发生后,蝴蝶兰外植体细胞结构破坏,细胞壁有明显的皱缩,有的地方断裂较明显,细胞中沉积大量的黑色颗粒状物质。 2.利用高效液相色谱仪,对蝴蝶兰组培外植体褐化前后体内的酚酸进行定性定量分析,初步表明绿原酸、邻苯二酚、儿茶酚、咖啡酸是与蝴蝶兰(R4)褐化相关的酚酸,而起主要作用的则可能是邻苯二酚和绿原酸。 3.培养基pH6.5或培养温度20℃时蝴蝶兰外植体褐化率最低。在培养温度(25℃)相同时,PPO活性、总酚含量高低并不与pH值大小成正比,且褐化率与PPO无显著相关性,pH5.0时,褐化率与总酚含量显著相关;在培养基pH(6.0)相同时,温度越高,褐化率越高,PPO活性越强,总酚含量越高,且20℃时,褐化率与PPO、总酚含量分别达到极显著、显著相关,30℃时,褐化率与总酚含量显著相关。 4.1000lx和3000lx光强下培养的蝴蝶兰外植体褐化较轻,2000lx光强培养的外植体褐化严重且PPO活性高于其他两处理,差异显著,三处理中褐化率与PPO活性均无显著相关性;各处理间总酚含量差异不显著,1000lx和2000lx条件下培养的外植体褐化率与总酚含量显著相关。黑暗预处理能减轻蝴蝶兰组培外植体褐化,其中以预处理10d的褐化最轻;未经暗处理的褐化最重且PPO活性最大,总酚含量无一致变化规律,各处理中褐化率与PPO活性显著相关,预暗培养5天的外植体褐化率与总酚含量显著相关。接种前对外植体遮光处理能有效减轻褐化,以双层膜遮光效果好;各处理中褐化率与PPO活性均无显著相关性,未遮光和双层膜遮光的外植体褐化率与总酚含量显著相关。……   
[关键词]:蝴蝶兰;组织培养;褐变;酚酸;多酚氧化酶;总酚
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:西北农林科技大学2006年