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抗猪传染性胃肠炎病毒M蛋白单克隆抗体的制备与鉴定

乔薪瑗

   本实验用IPTG诱导含有猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)重组M基因质粒的大肠杆菌,表达重组TGEV M蛋白。并以纯化的M蛋白为抗原,免疫BALB/c小鼠,按常规方法进行融合,间接ELISA方法进行筛选,采用有限稀释法,经过三次克隆,最终获得三株抗重组TGEV M蛋白的杂交瘤细胞系(命名为1B3、3C2、4A5),分泌的单克隆抗体分别为IgG2a、IgG1、IgG1类,三株杂交瘤细胞在体外长期培养和长期冻存时都稳定地分泌单克隆抗体。三株杂交瘤细胞的平均染色体数为85-95,间接ELISA检测1B3、3C2、4A5细胞培养上清的效价分别为1:4000、1:1000、1:4000,腹水效价分别为1:5×105、1:5×106、1:5×106。 通过间接ELISA做病原检测,分别与TGEV、PEDV、PRV和PrV反应,结果显示,这三株单抗与TGEV显示良好的特异性,而与PEDV、PRV和PrV不存在交叉反应。说明获得的单抗具有高度的特异性,可用于TGEV的诊断。 用实验获得的单克隆抗体和SP2/0细胞培养上清对感染TGEV的IBRS2细胞培养物进行了间接免疫荧光检测病原的比较研究:间接免疫荧光染色后,与单抗作用的细胞培养物中,多数细胞在其胞浆和细胞膜上出现黄绿色闪亮荧光,且荧光强度强,与SP2/0细胞培养上清作用的细胞培养物未见有黄绿色闪亮荧光,结果表明,利用所制备的抗TGEV重组M蛋白的单克隆抗体进行间接免疫荧光对病原检测具有较高的特异性。所有的实验结果表明,所制备的抗重组TGEV M蛋白的单抗对病原检测具有很强的特异性,为TGEV疫情监测和准确快速的病原诊断与鉴别诊断奠定了物质基础。……   
[关键词]:猪传染性胃肠炎病毒;重组M蛋白;单克隆抗体;间接ELISA;间接免疫荧光
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:东北农业大学2006年