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三氧化二砷诱导鸡MD肿瘤细胞凋亡机理的研究

张久丽

   鸡马立克氏病(Marek’s disease,MD)是一种由马立克氏病病毒(MDV)引起的以淋巴细胞增生为病变特征的肿瘤性疾病,由于超强毒株不断出现,使传统疫苗不能起到很好的保护作用,在长期使用HVT疫苗预防MD的过程中,国内外均有关于免疫失败的报道,给本病的控制和消灭带来了巨大的困难。而且鸡MD的许多特性与哺乳动物肿瘤的发生有相似之处,被作为研究肿瘤性疾病的良好模型。三氧化二砷(As_2O_3)首先被用于急性早幼粒细胞白血病(APL)治疗,现已经引申到实体瘤的治疗上,由此推动了对其抗肿瘤机制的研究。目前关于As_2O_3抗MD肿瘤机制的研究还很少,本课题选择MDCC-MSB1细胞系为试验对象,通过对细胞凋亡相关指标的检测,进而探讨其诱导细胞凋亡的机制,为临床应用As_2O_3治疗MD及其他肿瘤性疾病提供理论依据。研究结果表明: 1.采用四唑蓝快速比色法(MTT法)观察As_2O_3对MDCC-MSB1细胞生长的抑制作用,结果表明各浓度组As_2O_3均可以抑制MDCC-MSB1细胞增殖,且抑制率具有剂量依赖性。 2.倒置显微镜下观察MDCC-MSB1细胞生长情况;吖啶橙/溴化乙锭(AO/EB)双荧光染色荧光显微镜下观察不同浓度下As_2O_3诱导MDCC-MSB1细胞凋亡的形态学变化。结果表明As_2O_3诱导MDCC-MSB1细胞凋亡,且凋亡率具有剂量依赖性。 3.应用Rhodamine123染色流式细胞术检测法检测△Ψm变化,结果表明As_2O_3可通过引起MDCC-MSB1细胞△Ψm降低而诱导细胞凋亡。 4.RT-PCR方法检测MDCC-MSB1细胞Caspase3mRNA表达水平;Caspase3比色检测试剂盒,应用酶标仪检测Caspase3活性的变化,结果表明Caspase3活性增加是As_2O_3引起MDCC-MSB1细胞凋亡的关键因素。 5.应用Fura-2/AM荧光法和RT-PCR方法分别检测细胞内[Ca~(2+)]i的变化和CaMmRNA表达水平,结果表明As_2O_3可通过引起MDCC-MSB1细胞内[Ca~(2+)]i增加,钙稳态失衡机制而诱导细胞凋亡。 6.RT-PCR方法检测MDCC-MSB1细胞Fas表达水平。结果表明As_2O_3可通过引起MDCC-MSB1细胞FasmRNA的表达增加而诱导细胞凋亡,这可能是As_2O_3诱导MDCC-MSB1细胞凋亡的机制之一。 As_2O_3能抑制MDCC-MSB1细胞的生长并诱导其凋亡。As_2O_3诱导凋亡与降低MDCC-MSB1细胞△Ψm,增加细胞内[Ca~(2+)]i,Caspase3mRNA表达Caspase3活性增加,FasmRNA表达上调有关。……   
[关键词]:三氧化二砷;MDCC-MSB1;细胞凋亡;线粒体跨膜电位;钙稳态
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:东北农业大学2006年